HPLC法測定復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊中L-谷氨酰胺的釋放度.pdf

1、目的：采用HPLC方法測定復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊中 L-谷氨酰胺的釋放度。 方法： 1．崩解時限的檢查1．1 人工胃液和人工腸液的配制人工胃液：取稀鹽酸 16.4mL，胃蛋白酶 10g，，加水稀釋成 1000mL，即得。人工腸液：取磷酸二氫鉀6.8g，加水 500mL 使溶解，并調(diào)節(jié)pH值為 6.8；另取胰酶 10g，加水溶解；將兩液混合后，加水至 1000mL，即得。 1．2檢查法用吊籃法檢查。取膠囊6粒，先

2、在鹽酸溶液(9→1000)中檢查2h，每粒囊殼均不得有裂縫或崩解現(xiàn)象。繼將吊籃取出，每管各加入擋板一塊，再分別置吊籃的玻璃管中，啟動崩解儀在人工腸液中進(jìn)行檢查，1h后全部崩解，則符合規(guī)定，否則，重做。 2．釋放度的測定2．1色譜條件色譜柱：Phenomenex NUCLEOSIL 5 NH<,2>100A(250 mm x 4．6 mm)；流動相：乙睛-0.05mol·L<'-1> 磷酸二氫鉀緩沖液(取磷酸二氫鉀6.8 g，加水

3、溶解至 1000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至 4.0) (70∶30)；檢測波長 215：nm；流速：1mL·min<'-1>；進(jìn)樣量：20μL。 2．2系統(tǒng)適用性試驗2．2．1 專屬性考查取“2.2.2”項下0.1mg·mL<'-1> 的L-谷氨酰胺對照品溶液，進(jìn)樣量20 μ l，得L-谷氨酰胺對照品溶液的高效液相色譜圖。 稱取復(fù)方谷氨酰胺膠囊內(nèi)容物細(xì)粉適量 (約相當(dāng)于L-谷氨酰胺 120mg)，置250mL容量瓶，

4、加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾；取續(xù)濾液2mL，置 10mL容量瓶，加流動相稀釋至刻度，進(jìn)樣量20 μl，得復(fù)方谷氨酰胺樣品溶液的高效液相色譜圖。 2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備配制濃度為0.025，0.05，0.10，0.15，0.20 mg·mL<'-1>的L-谷氨酰胺對照品溶液。用HPLC測峰面積并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2.2.3同內(nèi)精密度考察取“2.2.2”項下0.05，0.10，0.15 mg·mL<'-1>的標(biāo)準(zhǔn)曲線

5、制備液，于同內(nèi)(8h內(nèi))間隔進(jìn)樣5次，檢測低、中、高3個濃度的測定精密度。 2.2.4準(zhǔn)確度的考察(加樣回收率) 精密稱取復(fù)方谷氨酰胺膠囊內(nèi)容物細(xì)粉0.20g(相當(dāng)于L-谷氨酰胺120 mg)2份，分別置250mL容量瓶；再分別精密稱取L-谷氨酰胺對照品50mg及125mg，加入上述容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾；分別取續(xù)濾液2mL，置10mL容量瓶，加流動相稀釋至刻度，用HPLC法測定并計算回收率

6、。 2.3穩(wěn)定性的考察如“2.2.2”項下配制0.1 mg·mL<'-1>的L-谷氨酰胺對照品溶液，于0，1，2，4，8h分別進(jìn)樣，考察L-谷氨酰胺對照品溶液的放置穩(wěn)定性。 2.4釋放度測定取復(fù)方谷氨酰胺膠囊樣品，按釋放度測定法操作。 2.4.1酸中釋放量取0.1 mg ·mL<'-1>鹽酸溶液900mL，注入每個容器，保持溫度在37℃±0.5℃，調(diào)整轉(zhuǎn)速100r·min～。取6個膠囊分別投入轉(zhuǎn)籃中，開動儀器

7、運轉(zhuǎn)2h，在規(guī)定取樣點吸取溶液5mL，并經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，用HPLC法測定。按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算濃度，和每粒膠囊的釋放百分率。 2.4.2緩沖液中釋放量‘棄去上述各容器中酸液，立即加入磷酸鹽緩沖液(pH6.8)900mL，繼續(xù)運轉(zhuǎn)85min，在規(guī)定取樣點吸取溶液5mL，立即經(jīng)0.22μm微孔濾過，取濾液，用HPLC法測定復(fù)方谷氨酰胺膠囊釋放液色譜。按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算濃度，和每粒膠囊的釋放百分率。 結(jié)果：

8、 1.崩解時限檢查結(jié)果復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊在人工胃液中2小時內(nèi)腸溶衣層均完好，且在人工腸液中均在45分鐘內(nèi)崩解，即復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊的崩解時限合格。 2.釋放度的測定2.1系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果2.1.1專屬性考查結(jié)果結(jié)果顯示L-谷氨酰胺峰的保留時間為12.3 min，理論塔板數(shù)按L-谷氨酰胺峰計為4600。 2.1.2緩沖液中釋放度結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=16.884C-O.0438 (R=0.9999)線性范圍0.5

9、～4μg。 2.1.3同內(nèi)精密度考察結(jié)果結(jié)果表明L.谷氨酰胺高、中、低三個濃度同內(nèi)精密度分別為 RSD1.72﹪，0.62﹪，0.97﹪。符合藥典規(guī)定。 2．1．4 準(zhǔn)確度考察結(jié)果結(jié)果表明L-谷氨酰胺中、低2個濃度加樣回收率分別為98.0﹪、99.0﹪，RSD為2.13﹪，1.60﹪。符合藥典規(guī)定。 2．1．5 穩(wěn)定性的考察結(jié)果結(jié)果表明L-谷氨酰胺溶液在8h內(nèi)含量穩(wěn)定。 2．2釋放度測定結(jié)果2．2．1 酸中

10、釋放量結(jié)果表明 L-谷氨酰胺2h釋放度為零，符合藥典規(guī)定。 2．2．2 緩沖液中釋放度結(jié)果結(jié)果表明 L-谷氨酰胺在緩沖液中 45min時的釋放度為 40.77﹪，未達(dá)到藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。65min時釋放度才達(dá)到71.05﹪，85min達(dá)78.98﹪。 結(jié)論：本文采用的HPLC法可以用于測定復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊中L-谷氨酰胺的釋放度。且復(fù)方谷氨酰胺膠囊的崩解時限檢查結(jié)果符合規(guī)定；其釋放度未達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。 關(guān)健詞：L