甜菜M14品系表達(dá)基因M14-100、M14-265、M14-G12 cDNA全長(zhǎng)克隆與序列分析.pdf

1、甜菜M14品系是由栽培甜菜(Beta vùlgaris L．)與野生白花甜菜(Betacorolliflora Zoss.)種間雜交，進(jìn)一步回交獲得的甜菜無(wú)融合生殖單體附加系，其染色體組除了含有18條栽培甜菜染色體外，還附加有白花甜菜第9號(hào)染色體，附加染色體的傳遞率高達(dá)96.5％，如此高的傳遞率是由于附加的第9號(hào)染色體攜帶無(wú)融合相關(guān)基因所致。因此，甜菜M14品系是無(wú)融合生殖研究極其難得的材料。同時(shí)，甜菜M14品系還具有抗寒、抗病的優(yōu)良性

2、狀，對(duì)M14品系特異表達(dá)基因的研究，也有助于我們挖掘和利用甜菜M14品系具有的優(yōu)良基因。 為了克隆甜菜M14品系中無(wú)融合生殖相關(guān)基因，實(shí)驗(yàn)室前期采用抑制消減雜交方法獲得了298個(gè)甜菜M14品系特異表達(dá)的ESTS。本研究挑選其中3個(gè)有研究?jī)r(jià)值的ESTs作為侯選ESTs，采用SMART RACE技術(shù)獲得了侯選ESTs所在基因--M14-100、M14-265和M14-G12的cDNA全長(zhǎng)，并采用RT-PCR法進(jìn)行驗(yàn)證，最后對(duì)三個(gè)目的

3、基因的cDNA全長(zhǎng)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。 M14-100 cDNA全長(zhǎng)1707bp，GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)接受號(hào)為EU529829，經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析，該基因序列與來(lái)自擬南芥(Arabidopsis thaliana)的細(xì)胞周期蛋白相關(guān)基因序列有60～70％的相似性，但該基因的功能目前還不清楚；M14-100 cDNA最長(zhǎng)讀碼框編碼324個(gè)氨基酸；推定編碼蛋白的分子量為34.4 kD，理論等電點(diǎn)5.11，有較強(qiáng)的親水性；為非分泌型

4、蛋白：推定蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明，含有6個(gè)α-螺旋和3個(gè)β-折疊。 M14-265 cDNA全長(zhǎng)1006bp，GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)接受號(hào)為EU529830，經(jīng)生物信息學(xué)分析認(rèn)為該基因是一個(gè)新基因；缺乏明顯的讀碼框，最長(zhǎng)讀碼框僅編碼81個(gè)氨基酸，可能以RNA的形式參與生命活動(dòng)，也可能編碼短肽；推定編碼蛋白的分子量為9.3 kD，理論等電點(diǎn)4.69，為非分泌型蛋白；推定蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)表明，該蛋白含有1個(gè)α-螺旋和2個(gè)β-折疊。

5、 M14-G12 cDNA全長(zhǎng)873bp，GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)接受號(hào)為EU529828，與來(lái)自擬南芥(Arabidopsis thaliana)的鈣調(diào)蛋白基因的氨基酸序列相似性達(dá)到99％，可以認(rèn)定該基因即是來(lái)自甜菜M14的鈣調(diào)蛋白基因：該基因編碼149個(gè)氨基酸，分析結(jié)果顯示其編碼蛋白分子量為16.8 kD，理論等電點(diǎn)4.11，總平均親水性為-0.620；二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該蛋白質(zhì)是一個(gè)富含α-螺旋的蛋白質(zhì)。三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，該蛋白包含