安徽省豬病毒性腹瀉病因調查及PEDV分子流行病學研究.pdf

1、摘要豬病毒性腹瀉是由病毒引起的急性消化道傳染病，主要病原有豬流行性腹瀉病毒(Pcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)，豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissiblegatroenteritisconavirus，TGEV)，豬輪狀病毒(Rotavirus，RV)，豬瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)，豬圓環(huán)病毒(Pcinecircovirusvirus，PCV)，豬偽狂犬病毒(P

2、cinepseudprabiesvirus，PRV)。其流行從2010年底開始在我國呈明顯的上升趨勢，尤其造成哺乳仔豬大量死亡，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。其中流行性腹瀉(pcineepidemicdiarrhea，PED)的危害最為嚴重，該病毒以損壞豬小腸為主，引起豬水樣腹瀉和嚴重脫水為主要臨床癥狀，已成為降低豬出欄率的重要原因之一。本文對安徽省部分地區(qū)豬場的豬腹瀉主要病毒性病原進行了流行病學調查和對PEDV的M、N、F3基因的遺傳進化

3、進行了研究，研究內容如下：(1)本研究對20102013年安徽省14個縣市的23個發(fā)生豬腹瀉的豬場采集了138份肛拭子、腸道及內容物，利用(RT)PCR方法對病料中7種主要病毒性腹瀉病原進行了檢測：CSFV、PRRSV、TGEV、PEDV、RV、PRV、PCV2等7種。檢測結果顯示，PED陽性豬場有19個，陽性率為82.6%，PED陽性病料81份，PEDV陽性率高達58.7%。其中CSFV、PRRSV、TGEV、RV、PRV、PCV2的

4、陽性檢出率分別為2.9%、1.44%、2.17%、1.44%、4.35%、7.25%。多個豬場出現(xiàn)PEDV與其它病毒的混合感染，其中與PCV2的混合感染最為嚴重，混感率為6%?；旌细腥驹谪i腹瀉病中廣泛存在，圓環(huán)病毒由于其免疫抑制作用，出現(xiàn)更嚴重的臨床癥狀。(2)為了探討安徽省流行的PEDV遺傳變異情況，本研究對19個PED陽性豬場的病料進行了PEDV的遺傳變異相關基因M和N及毒力基因F3的擴增及遺傳變異分析，以弄清安徽省PEDV分子流行

5、情況，為安徽省PED防控提供理論基礎。本研究參照Genbank中PEDV序列，設計4對特異性引物對PED陽性的19個豬場的陽性病料分別進行M、N和F3基因的擴增，擴增獲得的片段經切膠回收后連接pMD18T載體，挑取陽性克隆并測序，并用DNASTAR和MEGA5.0等軟件將目的基因進行同源性的比較和遺傳進化分析。所擴增的目的基因片段均有完整的開放閱讀框，M基因大小為681bp，N基因為1326bp，F(xiàn)3基因為675bp。M基因同源性分析表

6、明，安徽地區(qū)PEDV流行毒株M基因之間同源性為98.3%100%，與歐洲毒株(CV777；Br17)同源性為97.4%98.2%，與日本毒株(83p5)的同源性為97.4%98.4%，與韓國毒株(DR13；CPF531；PFF1051)同源性為97.1%98.2%，與我國其它省份：北京株(BJ2010)、廣東株(GDYD)、江蘇株(JS200402)、福建株(FJPT2011)、山東株(SDM)同源性為96.8%100%，與美國毒株(U