AG490對氯化鋰-匹羅卡品致癲癇星形膠質細胞活化的影響.pdf

1、目的：探討匹羅卡品致癲癇狀態(tài)下大鼠海馬內腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及星形膠質細胞的表達、增生規(guī)律，并探討JAK/STAT信號轉導通路在癲癇發(fā)作后對星形膠質細胞活化的影響。
　　 方法：應用腹腔注射氯化鋰－匹羅卡品（PILO）的方法建立顳葉癲癇模型，應用JAK/STAT 信號轉導通路特異性抑制劑 AG490進行腹腔注射建立干預模型組，應用生理鹽水代替匹羅卡品進行腹腔注射建立對照模

2、型組；用Western blot方法測定大鼠海馬勻漿后TNF-α表達的變化，免疫熒光化學方法對照觀察應用AG-490阻滯JAK/STAT 通路后對大鼠海馬TNF-α與星形膠質細胞活化的影響。
　　 結果：1.大鼠行為學觀察：生理鹽水對照組雄性大鼠沒有任何癇性發(fā)作。PILO 致癲癇模型組有 80.00％（32/40）的動物達 Racine分級Ⅳ級以上發(fā)作；10.00％（4/40）的雄性大鼠死亡；10.00％（4/40）的雄性大鼠未

3、達Racine分級Ⅳ級發(fā)作，模型成功率為90.00％；30天組中仍然有自發(fā)發(fā)作的有2只及25.00％（2/8）。AG490 干預組雄性大鼠Ⅳ 級以上發(fā)作的發(fā)生率為 75.00％（30/40）；死亡率為7.50％（3/40）；17.50％（7/40）的雄性大鼠未達Ⅳ 級發(fā)作，模型成功率為82.50％；30天時有Ⅳ 級以上發(fā)作僅7只。達到V 級發(fā)作占23只占76.67％（23/30）30天組中仍然有自發(fā)發(fā)作的有1只及12.50％（1/8），

4、Ⅳ級及以下發(fā)作同PILO 致癲癇模型組比較P<0.05有統(tǒng)計學意義；其他P>0.05，沒有統(tǒng)計學意義。
　　 2．Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)PILO模型組中，TNF-α在癲癇發(fā)作3小時時即較生理鹽水對照組開始增多，癲癇發(fā)作第3天 時達到最高峰，之后逐漸下降，至癲癇第發(fā)作30天蛋白表達水平仍比正常略高,30天時有III 級以上發(fā)作的比沒有發(fā)作的要高；AG490 干預組各時間點TNF-α表達均較 PILO組明顯減少。3

5、h組、12h組分別和24h、3d組相比有顯著性差異p<0.01,30d癲癇仍然有發(fā)作組和30d不發(fā)作組相比無顯著差異p>0.01
　　 3．雙重免疫熒光結果：有黃綠色顆粒者為陽性染色，且可以看見陽性顆粒在星形膠質細胞內的空間分布，AG490腹腔注射建立干預后，陽性顆粒的星形膠質細胞明顯減少,P<0.05，提示JAK/STAT信號轉導通路可以促進星形膠質細胞活化。
　　 結論：應用氯化鋰－匹羅卡品癲癇模型可以復制出與人類顳