CS-PAA-EPI磁性聚合物微球在膀胱癌靶向化療中的應(yīng)用基礎(chǔ)研究.pdf

1、研究目的：制備一種新型的磁性納米高分子聚合物微球—CS-PAA-EPI磁性聚合物微球，對其進(jìn)行表征檢測，并研究其靶向分布性、毒性及體內(nèi)、外抗腫瘤效應(yīng)，探討其在膀胱癌靶向化療中的應(yīng)用價值。 研究方法：1我們采用模板聚合的方法，以陽離子CS為模板，在表面帶有負(fù)電荷檸檬酸基團的Fe<,3>O<,4>磁流體的存在下，通過聚合AA生成了穩(wěn)定的CS-PAA 磁性聚合物微球，通過FT-IR、TEM、DLS、zeta 電位的表征檢測研究了CS-

2、PAA磁性聚合物微球的理化性質(zhì)，同時測定其載藥率和包封率。2建立EPI濃度HPLC測定方法，在外加磁場的作用下，HPLC法測定EPI在大鼠血液及各個臟器內(nèi)不同時間點的濃度，評價磁性 CS-PAA-EPI 微球的靶向性；通過普魯士藍(lán)染色法(鐵染色)直接觀察磁性 CS-PAA-EPI 微球在大鼠膀胱、肝、腎、心臟等臟器的分布差異；測定不同劑量磁性CS-PAA-EPI微球?qū)Υ笫笱Ｒ?guī)、肝腎功能、電解質(zhì)、血糖的影響，以評價其毒副作用。3利用MT

3、T法測定不同劑量磁性CS-PAA-EPI微球?qū)θ税螂装㏕24細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，流式細(xì)胞儀測定其對T24細(xì)胞凋亡的影響，通過Westem Blotting方法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bc1-2、Caspase-3、Caspase-9 蛋白和胞漿細(xì)胞色素C的表達(dá)，探討其殺傷癌細(xì)胞的機制。4建立人膀胱癌裸鼠移植腫瘤模型，利用磁性CS-PAA-EPI微球協(xié)同外磁場進(jìn)行靶向化療，通過瘤重抑瘤率、瘤體積抑瘤率、HE染色及TUNEL法評價其抗腫瘤效應(yīng)。

4、 研究結(jié)果：1 合成的CS-PAA 磁性聚合物微球呈球形，大小均一，TEM測定其干態(tài)下粒徑為80nm左右，磁化曲線證實具有超順磁性，具有一定的PH敏感性，固載表柔比星后，水溶液性狀穩(wěn)定，無沉淀物，DLS測定直徑約200nm左右，測定載藥率為15％，較文獻(xiàn)報道高，包封率為20％。2肉眼觀察試驗組大鼠膀胱表面呈褐色，可見大量的Fe粒子聚集，普魯士蘭染色法顯示，試驗組大鼠膀胱壁內(nèi)有大量的Fe粒子，分布至膀胱壁全層，與對照組大鼠相比，試

5、驗組大鼠的肝、脾內(nèi)的Fe粒子聚集量明顯降低；HPLC 測定結(jié)果與Fe染色相同；高劑量磁性CS-PAA-EPI生理鹽水組及單純EPI生理鹽水組均在給藥后14天出現(xiàn)血肌酐和尿素氮的升高，其他組大鼠血生化指標(biāo)沒有明顯變化。3 MTT法發(fā)現(xiàn)，高、中、低劑量磁性 CS-PAA-EPI生理鹽水組在外加磁場的協(xié)同作用下殺傷T24細(xì)胞效應(yīng)明顯高于單純的EPI生理鹽水組，F(xiàn)CM發(fā)現(xiàn)試驗藥物組可引起明顯的腫瘤細(xì)胞凋亡，試驗藥物治療組細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)了由線粒體

6、釋放出的細(xì)胞色素 C，試驗組細(xì)胞．Bcl-2 蛋白減少，Bax 蛋白變化不明顯，Caspase-3、Caspase-9 蛋白受到了激活活化。4高、中、低劑量磁性CS-PAA-EPI生理鹽水組(外加磁場)的瘤重抑制率和瘤體積抑制率均明顯高于單純的EPI生理鹽水組(P<0.01)，其中高劑量組的抑制率最高。HE染色及TUNEL法證實亦驗證上述結(jié)果。 研究結(jié)論：1 制備的磁性CS-PAA-EPI微球性質(zhì)穩(wěn)定、載藥率高，具有良好的磁響應(yīng)

7、性，可以作為一種靶向制劑應(yīng)用于膀胱癌靶向化療。2在外加磁性的作用下，磁性CS-PAA-EPI微球可以靶向至大鼠膀胱，同時減少肝、脾等臟器的分布，降低EPI的全身毒副作用。3通過磁性CS-PAA微球的包裹、靶向給藥可以明顯提高EPI殺傷T24細(xì)胞效應(yīng)，其機制可能是通過啟動了線粒體途徑的細(xì)胞凋亡實現(xiàn)的。4利用磁性納米微球CS-PAA-EPI對膀胱癌進(jìn)行靶向化療，其療效明顯優(yōu)于常規(guī)化療，為膀胱癌治療提供了新方法，有望成為表淺性膀胱癌TURBt