轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉葉面微生物多樣性變化.pdf

1、為了探討轉(zhuǎn)基因植物的商業(yè)化生產(chǎn)對生物安全性的影響，本試驗在2年大田栽培條件下，以轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉GK-12(Bt cotton)和常規(guī)棉泗棉3號fnon-Bt cotton)為材料，利用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法和分子生物學(xué)方法，對其葉面微生物遺傳多樣性進行了研究，結(jié)果如下： 1．棉花葉面可培養(yǎng)細(xì)菌、真菌和放線菌數(shù)量與其生長發(fā)育呈正相關(guān)。苗期葉面微生物的數(shù)量少，現(xiàn)蕾期開始增多，到花鈴期葉面微生物的數(shù)量達到高峰，吐絮期下降。雖然Bt cott

2、on和non-Bt cotton葉面微生物的數(shù)量隨棉花生長發(fā)育變化趨勢一致，但同一生育期兩個品種葉面微生物數(shù)量存在顯著差異：現(xiàn)蕾期和花鈴期Bt cotton葉面細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于non-Bt cotton，差異達到極顯著水平；在吐絮期， Bt cotton和non-Bt cotton葉面真菌的數(shù)量變化存在顯著差異；在現(xiàn)蕾期，Bt cotton葉面真菌的數(shù)量少于non-Bt cotton，差異達到極顯著水平：在現(xiàn)蕾期Bt cotton葉面

3、放線菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于non-Bt cotton，差異達到極顯著水平；在花鈴期non-Bt cotton葉面放線菌的數(shù)量多于Bt cotton，且差異達到極顯著水平。 2．根據(jù)各細(xì)菌生理群數(shù)量等級的劃分，在花鈴期和吐絮期，Bt cotton和non-Btcotton葉面細(xì)菌生理群共同的優(yōu)勢類群為好氣性纖維素分解菌和乳酸桿菌；兩個品種葉面其它細(xì)菌生理群則存在較大差異。 3．對Bt cotton和non-Bt cotton葉面

4、細(xì)菌生理群的多樣性變化分析表明：在花鈴期Bt cotton葉面細(xì)菌生理群Simpson指數(shù)、Shannon-Wiener指數(shù)和均勻度比 non-Bt cotton高；在吐絮期Bt cotton葉面細(xì)菌生理群Simpson指數(shù)、Shannon-Wiener指數(shù)和均勻度比non-Bt cotton低。 4．通過正交試驗設(shè)計，建立了棉花葉面微生物基因組總DNA的提取方法，最佳設(shè)計為：SDS濃度為20mg/mL，溶菌酶濃度為30mg/m

5、L，蛋白酶K濃度為10mg/mL，37℃溫育時間180min。 5．利用PCR-PAGE對葉面微生物進行分析，Bt cotton和non-Bt cotton的葉面微生物在苗期、現(xiàn)蕾期、花鈴期具有較高的相似性，遺傳多樣性較為一致，遺傳相似性系數(shù)分別為87％、88％、81％；在吐絮期，Bt cotton和non-Bt cotton的葉面微生物相似性低于65％，表明Bt cotton和non-Bt coaon葉面微生物的遺傳多樣性差異