鉤端螺旋體膠原酶在鉤體病中致病機(jī)制的研究.pdf

1、鉤端螺旋體（鉤體）對宿主組織的侵襲和引起的廣泛出血是鉤端螺旋體?。ㄣ^體?。┌l(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。鉤體在宿主組織中播散和致病的機(jī)制尚未被闡明。本研究應(yīng)用病理學(xué)和分子細(xì)菌學(xué)技術(shù)，從體內(nèi)和體外兩個(gè)方面研究問號(hào)鉤體賴型賴株的膠原酶在鉤體侵襲和宿主多臟器出血中的作用。 對問號(hào)鉤端螺旋體賴型賴株＃56601 (Leptospira interrogans serovarlai strain Lai ＃56601)的膠原酶基因colA(LA0872

2、)進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，它和其它多種致病性微生物膠原酶在基因和蛋白各級結(jié)構(gòu)水平存在相似性，提示ColA 蛋白可能行使與其它致病性微生物膠原酶相同的功能。 本研究首先在原核系統(tǒng)中克隆表達(dá)了colA，并用酶譜學(xué)分析(zymography)鑒定了該重組蛋白的活性。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，問號(hào)鉤體賴型賴株能轉(zhuǎn)錄并表達(dá)具有活性的膠原酶。通過PCR、RT-PCR 和酶譜學(xué)分析比較不同毒力鉤體代表株的膠原酶在DNA、RNA 和蛋白水平上的差異。結(jié)

3、果顯示，colA 在無毒株雙曲鉤體Patoc 1 中不存在，但存在于致病性鉤體的強(qiáng)毒株問號(hào)鉤體賴型賴株和減毒株(IPAV)中并且被轉(zhuǎn)錄； IPAV 培養(yǎng)基上清和超聲裂解后上清可檢測到降解膠原的活性，而雙曲鉤體Patoc 1 中未檢測到。 對鉤體病豚鼠模型進(jìn)行免疫組化和透射電鏡觀察顯示，在出血嚴(yán)重的肺組織中，鉤體分布的部位有膠原酶的表達(dá)，局部血管內(nèi)皮細(xì)胞和基膜有損傷，并有Ⅳ型膠原的降解。 本研究初步表明，問號(hào)鉤體賴