Beclin1基因過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、| f I l l lI I I II l lU I I l l l l lI f l l l 0Y 2 6 6 3 1 0 4中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論

2、文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名：王絲』砑 日期：型坐：羔：塑中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論

3、文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容( 保密內(nèi)容除外) ，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日 期：型生：[ 翌·中文論著摘要·B e c l i n l 基因過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制的初步研究目 的結(jié)腸癌是常見的惡性腫瘤之一，以4 0 歲～5 0 歲年齡組發(fā)病率最高，全球每年新發(fā)病例約8 0 0 萬人，占所有惡性腫瘤的1 0

4、 ％1 5 ％。結(jié)腸癌在我國的發(fā)病率有增高的趨勢，死亡率僅次子肺癌和肝癌，占我國惡性腫瘤第三位。B e c l i n l 基因也稱B E C N l 基因，是酵母A T G 6 的同系物，也是哺乳動物參與自噬的特異性基因。B e c l i n l 不僅參與自噬體的形成，還可通過調(diào)節(jié)自噬活性對腫瘤發(fā)生、發(fā)展起著重要作用。關(guān)于自噬基因B e c l i n l 與非小細(xì)胞肺癌，乳腺癌，宮頸癌等都有了相關(guān)的研究，但B e c l i n

5、l 與結(jié)腸癌在體內(nèi)外關(guān)系的研究還很少。本研究旨在利用B e c l i n l 基因在結(jié)腸癌細(xì)胞H C T l 5 和H C T l l 6 細(xì)胞中過表達(dá)，對細(xì)胞的自噬、凋亡、侵襲、生長活性及相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行檢測，以此來研究B e c l i n l 基因過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，初步探索自噬基因B e c l i n l 的在結(jié)腸癌中的分子機(jī)制。方法設(shè)計特異引物利用R T - P C R 方法從H C T l 5 細(xì)胞總R

6、N A 反轉(zhuǎn)錄B e c l i n l c D N A ，并連接到p U C m ．T 載體中，進(jìn)行酶切鑒定及測序。將測序正確的p U C m ．B e c l i n l克隆D N A 及p c D N A 3 ．1 ／m y c ．h i s ( + ) 質(zhì)粒D N A 擴(kuò)增，分別進(jìn)行E c o R I 、X b aI 雙酶切，純化B e c l i n l 和p c D N A 3 ．1 ／m y c —h i s ( + )

7、片段，連接，轉(zhuǎn)化，擴(kuò)增，酶切鑒定及測序。將構(gòu)建的B e c l i n l 質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染H C T l 5 、H C T l l 6 細(xì)胞并進(jìn)行G 4 1 8 篩選建立穩(wěn)定克隆細(xì)胞系，在D N A 水平進(jìn)行鑒定，分別在R N A 水平和蛋白水平上對p c D N A 3 ．1 ／m y c —h i s —B e c l i n l 質(zhì)粒進(jìn)行表達(dá)檢測，篩選獲得B e c l i n l 高表達(dá)結(jié)腸癌陽性克隆細(xì)胞株，并進(jìn)行相關(guān)實驗檢測，用