豬源H9N2亞型流感病毒遺傳變異和感染特性研究.pdf

1、豬被認(rèn)為是流感病毒的“中間宿主”和“混合器”，可同時(shí)感染禽流感病毒和人流感病毒，并可以通過(guò)在豬體內(nèi)的重組產(chǎn)生具有流行潛能的新毒株。對(duì)豬流感的監(jiān)測(cè)是流感流行病學(xué)研究中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。本研究對(duì)2003～2004年分離自山東和河南兩省不同豬場(chǎng)的12株豬H9N2亞型流感病毒的抗原性和遺傳特性進(jìn)行了分析。抗原性分析結(jié)果表明，5株山東分離株HA的抗原性不同于以往所分離到的禽H9N2亞型流感病毒，說(shuō)明發(fā)生了較大的變異，而7株河南分離株的抗原性未發(fā)生明

2、顯改變。HA裂解位點(diǎn)分析揭示，山東豬H9N2亞型流感病毒的HA裂解位點(diǎn)均為-R-L-S-R-，不同于已在我國(guó)禽群中流行的Dk/HK/Y280/97亞系病毒，而河南分離株HA裂解位點(diǎn)則與Dk/HK/Y280/97亞系病毒一致，均為-R-S-S-R-。進(jìn)化樹(shù)分析顯示，山東分離株的HA和NA基因形成了一個(gè)可能來(lái)源于早期H9N2亞型禽流感病毒的新的亞系，即SD/03-like亞系：而且山東分離株部分內(nèi)部基因與H5亞型病毒高度同源，證明這些病毒可

3、能是H9和3H5兩個(gè)亞型病毒的重排病毒；而河南分離株的所有基因都與禽源H9N2亞型流感病毒親緣關(guān)系較近。 流感病毒的宿主特異性是由HA與細(xì)胞上末端鏈接有糖基的唾液酸受體介導(dǎo)的。為了確定幾株豬H9N2亞型流感病毒分離株的受體結(jié)合特性，本研究在國(guó)內(nèi)首次建立一種類似間接ELISA的固相酶聯(lián)試驗(yàn)，即利用“病毒-受體-酶”三者之間耦聯(lián)的方法證實(shí)了豬H9N2亞型流感病毒Sw/SD/FJN/03仍然保持了禽源流感病毒的受體結(jié)合特性，即具有與S

4、A α 2，3Gal受體結(jié)合的能力，而Sw/SD/FNY/03和Sw/HN/2/04同時(shí)具有與SA α 2，3Gal和ISA α 2，6Gal兩種受體結(jié)合的能力。受體結(jié)合試驗(yàn)表明，H9N2禽流感病毒傳播給豬后，有可能導(dǎo)致病毒受體結(jié)合特性的改變。 為了闡明豬源H9N2病毒感染哺乳動(dòng)物后，TLR7在宿主抗病毒感染中的變化情況與作用，本研究利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了攻毒后不同時(shí)間內(nèi)小鼠肺組織中TLR7基因mRNA表達(dá)的變化。結(jié)果

5、發(fā)現(xiàn)，在感染流感病毒后的第1～3天，肺組織中T127含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，并伴隨著肺組織內(nèi)巨噬細(xì)胞的增加。隨后TLR7表達(dá)量開(kāi)始下調(diào)，攻毒后第5、7、14天與對(duì)照組相比，均不顯著；至第14天，攻毒組小鼠的肺臟已無(wú)明顯病理改變。該結(jié)果提示TLR7可能在介導(dǎo)宿主抗感染先天性免疫中發(fā)揮作用。 通過(guò)以上研究結(jié)果表明，H9N2亞型流感病毒在禽和豬之間的種間傳播增加了產(chǎn)生具有新的抗原性和遺傳特性毒株的可能性，并有可能導(dǎo)致禽流感