鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體研制及抗腫瘤實驗研究.pdf

1、鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體研制及抗腫瘤實驗研究學號：11200404108康建功，男，1963年生，副主任藥師，國家執(zhí)業(yè)藥師，中國藥學會高級會員，山東藥理學會會員，1992年考入山東醫(yī)科大學藥學院藥物化學專業(yè)，師從王慧才教授，1995年7月獲醫(yī)學碩士學位，濰坊醫(yī)學院附屬醫(yī)院工作至今，2004年考取中國海洋大學藥物化學博士，從師于王睿教授，發(fā)表論文20多篇，發(fā)明專利一項。目的：鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分提取分離純化，鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性

2、成分脂質(zhì)體的研制，鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分抗實驗性惡性腫瘤的藥效學研究，初步探討鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分抗癌作用機制，探索癌癥治療藥物靶向給藥的新思路、新方法和新技術(shù)。方法：捕捉地道鮮無蹼壁虎，并與蜥蜴相區(qū)別，MTT法體外藥理，藥效學指導下考察不同提取方法的有效性，篩選最佳提取方案，采用85％7,醇超聲提取鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分，利用逆相蒸發(fā)法、薄膜分散法、旋轉(zhuǎn)薄膜-超聲法制備抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體，以粒徑及其分布、包封率、載藥量等為指

3、標，通過單因素考察類脂材料用量、藥物用量、超聲強度、超聲時間和水浴溫度等對脂質(zhì)體的影響，制備包封率較高的藥物脂質(zhì)體。藥效學體外實驗用不同濃度的鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分混懸液，分別處理CT-26和Heper-G2細胞株，MTT檢測腫瘤細胞的生長活性，檢測細胞凋亡率；體內(nèi)動物實驗采用4～6周齡，體重(22±2)g，BALB/C小鼠動物造模。小鼠恒溫(25℃)，恒濕度(45％)常規(guī)飼養(yǎng)，各小鼠左后肢背側(cè)皮下接種CT-26細胞懸液0.1m1(5

4、.5×10<'5>·ml<'-1>)，篩選出造模成功小鼠，隨機分組：即正常對照組；荷瘤小鼠對照組；環(huán)磷酰胺陽性對照組；鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分治療組。鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分治療組：于接種高致瘤性CT-26腫瘤細胞10d后開始腹腔注射(ip)鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分混懸液及其脂質(zhì)體，劑量分別為1mg·kg<'-1>、5mg·kg<'-1>、10 mg·kg<'-1>；荷瘤小鼠對照組：腹腔注射等體積的生理鹽水。陽性對照組：腹腔注射環(huán)磷酰胺

5、100mg·kg<'-1>。各組均qd，每天上午～一次，共12天。于治療結(jié)束后脫頸處死全部小鼠，將小鼠摘眼球取血，ELISA法測定TNF-α含量，剝離瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。結(jié)果：體外藥理實驗顯示，85％乙醇超聲法提取物抑瘤率為46.95％。旋轉(zhuǎn)薄膜一超聲法制備抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體，優(yōu)化得到的藥物脂質(zhì)體在透射電鏡下呈類圓形，平均粒徑為(355.6±51.2)nm，包封率為52.50％，載藥量為4.16％，pH5.85，粒徑符合靶向要求

6、，達到預期目標。體外藥效學實驗表明：鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分混懸液呈時間及劑量依賴性抑制腫瘤細胞的增殖，抑制率9.52％～62.30％。Heper-G2細胞經(jīng)過1mg/ml，10mg/ml鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分分別作用48h后，隨著提取物濃度提高，早期凋亡率逐漸增加，高劑量濃度的藥物(凋亡率為33.2％)與對照組比較均能明顯誘導細胞凋亡(P<0.05)，但低濃度抗腫瘤活性成分引起的凋亡率與對照組的差異無顯著意義(P>0.05)。光鏡觀

7、察結(jié)果顯示，經(jīng)鮮無蹼壁虎提取液處理的Heper-G2細胞可見凋亡小體形成等典型的細胞凋亡形態(tài)，對照組細胞形態(tài)正常。體內(nèi)動物實驗顯示：鮮無蹼壁虎醇提混懸液抑制小鼠腫瘤生長，有一定劑量效應關(guān)系。造模給藥后，給藥組眼球血的TNF-α水平與對照組相比具有顯著差異性(P<0.01)，鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體高劑量平均抑制率為52.17％，顯示明顯的抗瘤作用(P<0.01)，中低劑量抑制小鼠腫瘤生長與陰性對照組比較，無顯著性差異(P>0.05

8、)，高劑量組與壁虎散組比較有顯著差異性(P<0.01)。同濃度鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體比其混懸液抑瘤率顯著增高。結(jié)論：85％乙醇超聲法提取鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分效果最佳，旋轉(zhuǎn)薄膜-超聲法制備抗腫瘤活性成分脂質(zhì)體包封率較高；鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分抗腫瘤活性成分能抑制多種腫瘤細胞的增殖，提取物混懸液與脂質(zhì)體均有抗癌作用，且在相同劑量下，脂質(zhì)體比藥物混懸液抑瘤效果更顯著(P<0.05)。本實驗首次證實鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分對BAL