泛素蛋白酶體通路在動(dòng)脈粥樣硬化中作用的研究.pdf

1、背景：動(dòng)脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類健康的常見病,多發(fā)病。目前認(rèn)為,其病理變化是一慢性炎癥過(guò)程,但發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。泛素蛋白酶體通路,是ATP依賴性的,非溶酶體的蛋白質(zhì)降解通路。該通路還參與NF- B通路的激活,研究發(fā)現(xiàn)NF- B通路在動(dòng)脈粥樣硬化病理變化中起著重要的作用。然而,泛素蛋白酶體通路是否直接參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程,尚不清楚。此外,氧化應(yīng)激狀態(tài)下,泛素蛋白酶體通路的活性中心,蛋白酶體26S和20S的活性是否受到影響,看法不

2、一;氧化應(yīng)激與泛素蛋白酶體通路功能之間的關(guān)系尚未闡明;非甾體抗炎藥,能通過(guò)抑制泛素蛋白酶體通路,介導(dǎo)多種癌細(xì)胞凋亡,抑制癌細(xì)胞的增殖。然而,將非甾體抗炎藥,作為泛素蛋白酶體通路的抑制劑,用于動(dòng)脈粥樣硬化的研究,尚未見報(bào)導(dǎo)。因此,我們提出假說(shuō):如果泛素蛋白酶體通路積極參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程,那么抑制其活性,有可能會(huì)減少炎癥因子的激活,延緩動(dòng)脈粥樣硬化的演進(jìn)。
　　目的：應(yīng)用動(dòng)脈粥樣硬化兔模型,在阿司匹林干預(yù)下,探討泛素蛋白酶體通

3、路在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制,檢測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)和蛋白酶體26S和20S的活性,觀察動(dòng)脈粥樣的病理變化與NF- B通路,以及泛素蛋白酶體通路功能之間的關(guān)系。
　　方法：1、將40只3月齡大小,體重相當(dāng)?shù)男挛魈m雄性兔,隨機(jī)分為正常飲食組(N)、正常飲食加阿司匹林組(NI)、高膽固醇飲食組(H)和高膽固醇加阿司匹林組(HI);
　　2、分別檢測(cè)各組總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL

4、)的水平,以及氧化應(yīng)激指標(biāo):超氧化無(wú)歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA);
　　3、檢測(cè)蛋白酶體26S和20S的活性;
　　4、HE染色觀察血管組織的病理變化;
　　5、免疫組化方法觀察泛素/UPC、I Bɑ、磷酸化I Bɑ及p65在各組血管組織中的表達(dá)情況;
　　6、運(yùn)用western blot檢測(cè)泛素/UPC、I Bɑ及磷酸化I Bɑ和p65在各組中的表達(dá);
　　結(jié)果：1、成功建立了

5、AS動(dòng)物模型;
　　2、H或HI組中的TC、TG、LDL和HDL的水平,分別高于正常飲食組N或NI,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而H和HI組,或N和NI組間比較沒(méi)有組間差異(P>0.05);
　　3、氧化應(yīng)激指標(biāo)中,H或HI組別的MDA明顯分別高于N或NI組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05),而H或HI組中SOD和CAT明顯分別低于N或NI組(P<0.05);
　　4、蛋白酶體26S在4組中沒(méi)有差別,而H組20S的活性

6、比任何一組均增高;
　　5、HE染色提示:H和HI組別的血管壁厚度分別比N和NI組明顯增厚,H組的粥樣斑塊明顯,且血管壁厚度比HI組明顯增厚(P<0.05);
　　6、免疫組化顯示:HI組中泛素/UPC和I Bɑ或pI Bɑ的表達(dá)比H組明顯增多,尤其是粥樣斑塊中的細(xì)胞表達(dá)更為突出,而p65在H組中的表達(dá)要比HI組增多;在NI中,泛素/UPC和I Bɑ或pI Bɑ的表達(dá),比N組明顯增多;
　　7、western blot

7、顯示:HI或NI組別中,泛素/UPC和I Bɑ或pI Bɑ的平均灰度值明顯高于H或N組(P<0.05);而H組的p65平均灰度值比其余3組均增高(P<0.05),而其他3組間比較,沒(méi)有明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：1、泛素蛋白酶體通路積極參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程;
　　2、氧化應(yīng)激狀態(tài)下,蛋白酶體26S的活性幾乎不受到影響,而20S的活性明顯增強(qiáng);
　　3、阿司匹林,能通過(guò)部分抑制泛素蛋白酶體通路的活性,特別