細菌群體感應(yīng)信號分子合成酶AmbB的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、隨著臨床上抗生素的廣泛使用，細菌已出現(xiàn)耐藥性，因此尋找新的抗感染途徑已成為當(dāng)今研究的熱點。群體感應(yīng)(quorum sensing，QS)作為細菌間傳遞信號的重要方式，可釋放自誘導(dǎo)物分子來調(diào)控多種毒力因子的釋放以及細菌的致病性。如今，QS已經(jīng)成為新型、抗耐藥菌藥物設(shè)計的重要靶標(biāo)，因該藥物不影響細菌生長只抑制QS調(diào)控的致病行為，理論上不會引起細菌的耐藥性。
　　銅綠假單胞菌是一種可引起呼吸道感染、肺炎等疾病的條件致病菌，其存在三種基于

2、信號分子的QS系統(tǒng):las、rhl和pqs系統(tǒng)。其中，las系統(tǒng)處于核心地位，它可以調(diào)控rhl和pqs的基因表達。但是，隨著對銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)的深入研究發(fā)現(xiàn)，las在群體感應(yīng)調(diào)節(jié)中的核心地位并不是絕對的。研究顯示非核糖體肽合成酶AmbB參與合成一種新型QS信號分子IQS，它在環(huán)境壓力下（如低磷環(huán)境）取代las進而對rhl、pqs系統(tǒng)進行調(diào)控。本論文擬通過生物化學(xué)的方法，結(jié)合X射線晶體學(xué)的研究手段對AmbB蛋白的C端結(jié)構(gòu)域進行研究，以

3、期從結(jié)構(gòu)生物學(xué)角度闡釋群體感應(yīng)信號分子IQS的產(chǎn)生機制，亦或為今后群體感應(yīng)抑制劑的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。
　　本研究結(jié)果包括:1.成功構(gòu)建表達載體，并利用原核系統(tǒng)表達蛋白，已獲得大量高純度AmbBc蛋白;2.篩選到10種AmbBc晶體生長條件，經(jīng)優(yōu)化成功得到用于衍射的單晶;3.收集到分辨率高達2.5(A)的數(shù)據(jù);4.成功制備重金屬衍生物及硒代甲硫氨酸晶體;5.通過定點突變引入甲硫氨酸增強反常散射信號解決相位問題，目前蛋白結(jié)構(gòu)已成功解析