15個(gè)塊菌菌株的形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)鑒定.pdf

1、本研究對(duì)供試的15份塊菌標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定的基礎(chǔ)上，又采用MS引物和ITS引物對(duì)線粒體核糖體小亞基rDNA、核基因組rDNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)定MS序列和ITS序列，通過相關(guān)軟件進(jìn)行序列分析并構(gòu)建系統(tǒng)關(guān)系圖。以期明確供試菌株的同源性和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，為當(dāng)?shù)氐膲K菌資源的保護(hù)、開發(fā)和可持續(xù)利用提供科學(xué)的依據(jù)。綜合鑒定結(jié)果如下： (1)通過對(duì)供試塊菌的形態(tài)特征和顯微結(jié)構(gòu)的研究，將供試菌株分為中國塊菌、會(huì)東塊菌、遼東塊菌、巨孢

2、塊菌、波奇塊菌、擬凹陷塊菌、喜峰塊菌和加州塊菌八類。 (2)用BLAST軟件在基因庫中搜索印度塊菌T.indicum(U89362)的序列同Z-H-2菌株序列用DNAMAN進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明二者序列的同源性達(dá)到99﹪，說明采用本試驗(yàn)的方法所獲得的序列的結(jié)果是可靠的。 (3)按照MS序列構(gòu)建構(gòu)建系統(tǒng)關(guān)系圖。通過樹狀圖可以將供試菌株分為3個(gè)類群。其中類群A中的供試菌株E-2-2與其它供試菌株的親緣關(guān)系均較遠(yuǎn)，在DNA的

3、堿基序列上也比其它所有供試菌株約多50個(gè)堿基，在形態(tài)學(xué)上與加州塊菌相同。 (4)通過形態(tài)學(xué)和線粒體DNA的MS序列、核DNA的ITS序列的研究發(fā)現(xiàn)，供試菌株Z-H-3的形態(tài)特征與黑塊菌類的印度塊菌相同，在核DNA序列系統(tǒng)關(guān)系圖中它與白塊菌類的波奇塊菌聚在一個(gè)分支中，且比其它供試菌株約少50個(gè)堿基，推測(cè)Z-H-3可能為介于黑塊菌類與白塊菌類間的過渡種類，在此暫定為本研究發(fā)現(xiàn)的新種，命名為擬印度塊菌(T.pseudoindicum)

4、。 (5)通過形態(tài)學(xué)鑒定，本試驗(yàn)供試菌株B-K-1、X-1-1和K-2-1歸為喜峰塊菌類，ⅠZ-H-1和Z-H-2歸為中國塊菌，但是通過ITS的序列分析發(fā)現(xiàn)，與印度塊菌(T.indicum)(AF106884)同源性高達(dá)99.82﹪，再結(jié)合中國塊菌同印度塊菌在子囊果的顏色、子囊果表面的疣狀結(jié)構(gòu)、產(chǎn)孢組織的顏色、菌脈的顏色、子囊孢子的顏色、子囊孢子的表面紋飾等諸多特征，推測(cè)中國塊菌同印度塊菌應(yīng)屬于同物異名。 (6)對(duì)系統(tǒng)關(guān)