肺癌轉(zhuǎn)移動物模型的建立及活體成像觀察.pdf

1、目的:建立了肺癌轉(zhuǎn)移動物模型，采用分子病理學方法檢測腫瘤轉(zhuǎn)移相關基因表達，驗證部分關鍵microRNA對人肺癌高轉(zhuǎn)移細胞系SPC-A-1sci侵襲和遷移能力的影響;應用小動物活體成像技術，以肺癌動物模型為主要對象，建立熒光報告基因的細胞轉(zhuǎn)染方法，活體觀察肺癌動物模型的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，為小動物活體成像技術在腫瘤動物模型中應用提供參考依據(jù)。
　　 方法:采用小鼠尾靜脈注射方法觀察長期傳代的高、低轉(zhuǎn)移細胞系的轉(zhuǎn)移特性;通過Weste

2、rn blot、FICC、IHC等分子病理方法檢測已知轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移促進基因CD44，OPN，MMP-9，EGFR在高、低轉(zhuǎn)移細胞系間的差異表達;采用siRNA干擾技術，篩選對人肺癌高轉(zhuǎn)移細胞系SPC-A-1sci侵襲和遷移能力有影響的microRNA。通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術建立肺癌熒光報告基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞，進而建立相應的肺癌動物模型，采用小動物活體成像技術觀察模型的成像效果，觀察指標包括標記率、靈敏度、光子信號面積，光子信號強度等。
　　

3、結果:動物體內(nèi)實驗表明8周時高轉(zhuǎn)移細胞系的肺轉(zhuǎn)移率為100％(12/12)，而低轉(zhuǎn)移細胞系的肺轉(zhuǎn)移率僅為16.67％(2/12)。與低轉(zhuǎn)移細胞系相比，轉(zhuǎn)移促進基因CD44，OPN，MMP-9，EGFR在高轉(zhuǎn)移細胞中的表達均顯著上調(diào)。選擇23個差異顯著的microRNA進行細胞水平的轉(zhuǎn)移潛能篩選，發(fā)現(xiàn)過表達microRNA148a和microRNA200c能顯著降低人肺癌高轉(zhuǎn)移細胞系SPC-A-1sci的侵襲和遷移能力，而對microRN

4、A148a和microRNA200c進行siRNA干擾則能顯著提高人肺癌低轉(zhuǎn)移細胞系SPC-A-1的侵襲和遷移能力。建立了GFP和GFP/Luc雙標記報告基因的細胞轉(zhuǎn)染方法，標記了SMMC-7721，SPC-A-1，SPC-A-1sci，NCI-H460，MDA-MB-231sci等5個細胞系，標記率達90％以上。小動物活體成像系統(tǒng)的靈敏度，體外水平為100個GFP細胞，體內(nèi)水平為1×105個GFP細胞或100個Luc細胞。建立了小鼠皮