CTAB透性化酵母細胞為核絲素蛋白為衣的載藥雙壁微球的制備和性能考察.pdf

1、目的：本實驗旨在制備出一種以CTAB透性化處理的酵母細胞為核，絲素蛋白為殼的雙壁微球，將降壓藥物卡維地洛載入細胞中達到較好的釋放效果。所以在選擇雙壁微球的核材料和殼材料都尤為重要。根據(jù)大量參考文獻可以確定絲素蛋白是一種優(yōu)良的殼材料，另外根據(jù)我們之前的基礎(chǔ)研究推測，酵母細胞通過CTAB透性化處理后有可能成為一種優(yōu)良的核材料。依據(jù)以上分析做了如下實驗。
　　方法：第一部分:以紫外分光光度計在波長200nm-400nm范圍內(nèi)對卡維地洛溶

2、液進行掃描確定其最大吸收波長。對卡維地洛-酵母細胞微球的載藥量測定方法的建立，對酵母細胞載藥后和對其包衣后體外釋放的測定方法的建立。第二部分:以未處理的、CTAB、NaCl和酸-堿分別處理的酵母細胞，利用PCM觀察其表面形態(tài)變化，用TEM觀察細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)變化，用FT-IR、DSC和TGA圖譜分析細胞處理后的結(jié)構(gòu)成分變化，用共聚焦顯微鏡分析細胞不同處理后的透性化效果。第三部分:CTAB、NaCl和酸-堿處理的酵母細胞分別載入藥物卡維地洛

3、，以紫外分光光度計測定其載藥量，用FT-IR、DSC和TGA分析載入藥物后細胞結(jié)構(gòu)成分的變化。第四部分:選擇CTAB處理的酵母細胞做體外釋放，因為此處理方法有較高的載藥量而且根據(jù)前面的分析細胞的完整性也保持的較好，再利用絲素蛋白對載藥的酵母細胞進行包衣成雙壁微球，并與未包衣的酵母細胞進行體外釋放比較。以SEM觀察絲素蛋白對載藥的酵母細胞微球的包衣效果。
　　結(jié)果：第一部分:通過用紫外分光光度計在波長200nm-400nm范圍內(nèi)對卡

4、維地洛溶液進行掃描，確定其最大吸收波長為240nm。通過對卡維地洛-酵母細胞微球的載藥量測定方法的建立，對酵母細胞載藥后和對其包衣后體外釋放的測定方法的建立，經(jīng)方法學(xué)驗證，該方法準確可靠、靈敏度高、操作簡單。第二部分:以未處理的酵母細胞、CTAB、NaCl、和酸-堿處理的酵母細胞四個樣品，在相差顯微鏡下觀察到前三個樣品的形態(tài)都是圓球形，而酸-堿處理的細胞呈現(xiàn)出不規(guī)則形態(tài)且高度聚集。還可以看到CTAB處理的酵母細胞壁內(nèi)側(cè)有明顯的“黑點”，

5、NaCl處理的酵母細胞發(fā)生了質(zhì)壁分離，多數(shù)細胞呈現(xiàn)出不規(guī)則形態(tài)，僅有少數(shù)細胞仍然呈橢圓形，酸-堿處理得酵母細胞沒有出現(xiàn)黑點且顏色很淺。TEM觀察到CTAB處理的酵母細胞基本上保持細胞的完整性，NaCl處理的酵母細胞有部分已破損，酸-堿處理酵母細胞已絕大部分破損。FT-IR、DSC和TGA圖譜顯示出酵母細胞經(jīng)過不同處理后在結(jié)構(gòu)組成上的部分變化。共聚焦顯微鏡可以觀察出CTAB處理的酵母細胞染色最深且整個細胞均被染色，NaCl處理的酵母細胞和

6、酸-堿處理酵母細胞基本上都沒有被染色上，說明CTAB處理后酵母細胞通透性增加。第三部分:以CTAB、NaCl和酸-堿分別處理的酵母細胞再分別載入藥物卡維地洛，以紫外分光光度計測定其載藥量分別為29.3％、10.51％、2.74％。FT-IR、DSC和TGA圖譜與載入藥物之前的細胞相比也有相應(yīng)的變化。第四部分:CTAB處理的酵母細胞載藥的體外胃模擬釋放在2h時為92.2％，而包衣后即利用絲素蛋白對載藥的CTAB處理的酵母細胞進行包衣后的體

7、外胃模擬釋放在2.0h為45％，24h時達到90.4％，所以利用絲素蛋白對酵母細胞包衣成雙壁微球后達到較就明顯的緩釋作用。SEM圖可以觀察絲素蛋白在酵母細胞微球表面形成的包衣。
　　結(jié)論：本實驗建立了利用CTAB透性化處理酵母細胞的方法，與其他處理方法相比有更高的載藥量和對細胞本身的完整性保持更好。并且本實驗通過對載藥的細胞用絲素蛋白進行包衣，使之成為以CTAB透性化處理酵母細胞為核和以絲素蛋白包衣層為殼的雙壁微球材料，可以較好的