我國幾種木本植物植原體的分子檢測與鑒定.pdf

1、論文主要包括泡桐叢枝病和棗瘋病植原體的分子檢測、中國幾種木本植物植原體的比較鑒定和泡桐叢枝病染色質外DNA分析三方面研究內容.該研究首次對野生酸棗上發(fā)生的瘋病進行了田間發(fā)病率調查,并應用合成的植原體通用引物,通過PCR及nested-PCR技術分別檢測了野生酸棗和栽培大棗、幾個抗棗瘋病的棗樹品種、鄭州脫毒棗樹組培苗和該實驗室的脫毒泡桐組培苗(種苗),并研制了PCR快速檢測試劑盒.結果顯示,棗瘋病病區(qū)的野生酸棗瘋病發(fā)病很普遍,野生酸棗和嫁

2、接棗樹的無癥帶菌率高達10~35%;河北省抗病棗樹品種中壺瓶棗和蛤蟆棗對棗瘋病植原體的生長和繁殖有抑制作用;鄭州送檢的兩批脫毒棗樹組培苗中第一批的4個樣品均有植原體病菌檢出,第二批的10個樣品均未檢測到植原體病菌,該實驗室6個脫毒組培苗無性系檢測均未攜帶病菌.實驗證明檢測試劑盒能成功用于植原體檢測,并使其更加簡便、快速.通過對桑萎縮病(MDD)、棗瘋病(JWB)、酸棗叢枝病(WJWB)、泡桐叢枝病(PaWB)和苦楝叢枝病(CWB)植原體

3、16SrDNA、23SrDNA和核糖體蛋白(rp)基因的PCR擴增、異源雙鏈遷移率分析(HMA)、16SrDNA PCR產物的限制性片段多態(tài)性分析(RFLP)以及植原體16SrDNA和rp基因的克隆和序列分析等比較研究,建立了一種快速確定未知植原體種類和分類地位的分子鑒別與鑒定優(yōu)化程序;此程序可對田間采集的各種植物植原體樣品直接進行快速鑒定和鑒別.根據16SrDNA序列分析和比較,首次將中國發(fā)生的苦楝叢枝病和國槐叢枝病(SWB)進行了鑒

4、定和歸類,CWB為翠菊黃化組;SWB為榆樹黃化組成員.野生酸棗叢枝病和棗瘋病植原體的16SrDNA序列和rp基因序列比較分析證明二者是同一種植物植原體侵染棗屬的不同植物.應用感染植原體的泡桐組培苗提取和分離植原體,通過植原體DNA的提取與純化以及瓊脂糖電泳和DIG探針雜交等實驗,發(fā)現泡桐叢枝病植原體染色質外DNA可能有6條,分子量大小分別為8kb、6kb、3.5kb、2.4kb、2.2kb和1.8kb左右,為下一步深入開展泡桐叢枝病染色