山東省桑萎縮、棗瘋病及其它三種植原體的分子檢測與鑒定.pdf

1、本論文利用分子生物學(xué)手段對與山東省桑黃化型萎縮病、棗瘋病、苦楝叢枝、莧菜褪綠和國槐叢枝相關(guān)的植原體進行了檢測與鑒定。
　　 對采自山東泰安、寧陽、新泰的表現(xiàn)黃化、萎縮癥狀的桑樹植株總DNA進行secY基因PCR擴增，分別得到約1.4kb的特異片段，將片段克隆后進行序列測定，表明該片段長1361bp，包含secY基因1242bp，編碼414個氨基酸。通過構(gòu)建系統(tǒng)進化樹、同源性比對及利用9種限制性內(nèi)切酶進行模擬RFLP分析，初步確定

2、該植原體屬于secYI-B亞組，在亞組水平上進一步明確了桑黃化型萎縮病植原體的分類地位。secA基因擴增得到842bp的目的片段，編碼280個氨基酸，基于secA基因的分析結(jié)果表明桑黃化型萎縮病植原體屬于16SrI-B亞組，與基于16S rRNA分析結(jié)果一致。
　　 利用FD9f/r引物對采自山東11個地區(qū)的棗瘋病樣品進行secY基因的PCR擴增，并進行了序列測定，結(jié)果表明，該特異片段大小為1421bp，對獲得的序列與NCBI數(shù)

3、據(jù)庫中相關(guān)植原體序列進行同源性分析、構(gòu)建系統(tǒng)進化樹和模擬RFLP分析，結(jié)果顯示山東棗瘋病植原體屬于secYV-C亞組，與secYV-B亞組的櫻桃致死黃化（CLY5）和secYV-N亞組的桃樹致死黃化印度分離株系（PY-In）的親緣關(guān)系最近，在亞組水平上進一步明確了山東棗瘋病植原體的分類地位。secA基因擴增得到836bp的特異片段，編碼277個氨基酸，分析結(jié)果表明棗瘋病植原體屬于16SrV組，與已報道結(jié)果一致。
　　 對莧菜褪綠

4、植原體進行tuf、secY和secA基因的PCR擴增，分別得到大小約0.8 kb、1.4 kb和0.8 kb的目的片段并進行了序列測定。通過序列同源性比對、構(gòu)建系統(tǒng)進化樹及模擬RFLP分析，確定該植原體屬于tufI-B和secYI-B亞組，并發(fā)現(xiàn)其基因序列與桑黃化型萎縮病植原體高度同源。
　　 以山東苦楝叢枝病病株總DNA為模板，進行PCR擴增和序列測定，分別得到16S rRNA(1432 bp)、核糖體蛋白基因rp(1240

5、bp)、延伸因子基因tuf(842 bp)、轉(zhuǎn)運蛋白基因secY(1361 bp)和轉(zhuǎn)運蛋白基因secA(842 bp)的序列。對獲得的序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中相關(guān)植原體序列進行同源性分析、構(gòu)建系統(tǒng)進化樹和RFLP分析，結(jié)果顯示山東苦楝叢枝植原體屬于16SrI-B、rpI-B、tufI-B、secYI-L亞組。
　　 通過電鏡觀察和PCR檢測，證明國槐叢枝病的病原為植原體，通過對16S rRNA基因、rp基因、secY基因和sec