大連棗瘋病病原鑒定.pdf

1、植原體是一類沒有細胞壁、存在于植物韌皮部篩管細胞中的植物病原微生物。它可引起植物黃化、叢枝、花變?nèi)~、矮縮或花器退化等癥狀，導(dǎo)致糧食、果樹、蔬菜、花卉等幾百種植物致病。它所引起的病害已遍布世界各地，我國發(fā)生也很嚴重，其危害程度已上升為僅次于真菌、病毒病害的第三大類植物病害。 本研究根據(jù)植原體病害的癥狀學(xué)特點，對我國部分省區(qū)果樹植原體病害進行了病害調(diào)查并采樣，以基于植原體16S rRNA基因設(shè)計的通用引物、運用巢式PCR，對其采集到

2、的病樣進行了分子生物學(xué)檢測，以查明該類病害在果樹上的發(fā)生現(xiàn)狀。對采樣中檢測出來的大連市棗瘋病植原體，進行了基因序列分析及計算機模擬的RFLP分析，填補了遼寧省大連地區(qū)棗瘋病病原鑒定的空白。主要研究結(jié)果如下： 1、以基于植原體16S rRNA基因設(shè)計的通用引物(R16mF2/R16mR1及R16F2/R16R2)、運用直接及巢式PCR，對從遼寧、河南、湖北等果樹產(chǎn)區(qū)采集到的、100多個疑似植原體病害的樣本，進行了分子生物學(xué)檢測，僅

3、在遼寧省大連市的棗瘋病樣本中，出現(xiàn)了植原體特異的擴增條帶。 2、對大連市發(fā)病較嚴重的營城子區(qū)，進行了棗瘋病發(fā)病率和病情指數(shù)的調(diào)查。該區(qū)棗瘋病平均發(fā)病率為22％、病情指數(shù)8.67。電鏡觀察感病葉片的病組織超薄切片，在其韌皮部篩管細胞中發(fā)現(xiàn)了典型的植原體細胞。 3、對大連棗瘋株系(JWB-DL)的16S rDNA基因進行了序列測定，該序列(GenBank登錄號為EF661582)為1851個核苷酸。將JWB-DL與NCBI中

4、登錄的序列進行Blast序列比對，結(jié)果與屬于16SrV的榆樹黃化植原體(GenBank登錄號為AF189214)具有較高的同源性(98％)，推斷JWB-DL應(yīng)屬于同一個組即榆樹黃化組(16SrV)。計算機模擬RFLP分析也表明它屬于榆樹黃化組(16SrV)。將JWB-DL與所屬植原體組中的各亞組代表株系進行16S rDNA序列比對，通過構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹的聚類分析，表明JWB-DL與CLY植原體同屬于16SrV-B亞組。JWB-DL與其它