棗縮果病病原菌的分離鑒定及棗樹(shù)內(nèi)生真菌多樣性分析.pdf

1、本文對(duì)河南省新鄭主要棗產(chǎn)區(qū)的縮果病進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究,詳細(xì)觀察了棗縮果病的癥狀特點(diǎn)及發(fā)病情況,對(duì)病原菌進(jìn)行了分離純化、致病性測(cè)定以及形態(tài)和分子鑒定。國(guó)際上首次發(fā)現(xiàn)棗縮果病一種新病原細(xì)菌,首次準(zhǔn)確鑒定出該病殼梭孢屬和莖點(diǎn)霉屬真菌病原種。首次對(duì)棗樹(shù)內(nèi)生真菌多樣性進(jìn)行了研究。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。
　　 1.調(diào)查發(fā)現(xiàn)該病害的癥狀表現(xiàn)為:病害發(fā)生初期,在果實(shí)肩部或胴部出現(xiàn)淡黃色不規(guī)則暈斑；隨病情發(fā)展,病斑擴(kuò)大,顏色加深,并稍有凹陷；后期,

2、果實(shí)病部皺縮,果肉海綿狀壞死,食之味苦。采用常規(guī)方法進(jìn)行病原菌的分離,從210個(gè)病果樣品中分離得到266個(gè)分離物,經(jīng)篩選純化后依據(jù)分離物的形態(tài)特征和培養(yǎng)特性,初步歸類為5種真菌分離物:zs081、zs082、zs083、zs091和zs092和2種細(xì)菌分離物:zs09b1和zs09b2?？傮w上看,菌株zs082、zs083、zs091的分離頻率較高。
　　 2.經(jīng)致病性測(cè)定結(jié)果表明,菌株zs082、zs083、zs091和zs0

3、9b2經(jīng)單獨(dú)或混合接種,均能引起發(fā)病,且均表現(xiàn)為典型縮果癥狀,與田間病果癥狀相同,病果分離出的菌株與原接種菌株相同。據(jù)此證明,zs082、zs083、zs091和zs09b2為棗縮果病病原菌。
　　 3.依據(jù)病原菌的培養(yǎng)特性、形態(tài)特征及生理生化特征,zs082被鑒定為七葉樹(shù)殼梭孢FusicoccumaesculiCorda.,zs083被鑒定為頭狀莖點(diǎn)霉Phomaglomerata,zs091被鑒定為鏈格孢Alternariaa

4、lternata(Fr.)Keissler,zs09b2被鑒定為解淀粉芽孢桿菌Bacillus.amyloliquefaciens。
　　 4.采用核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)對(duì)棗縮果病病原菌進(jìn)行分子水平上的鑒定,比對(duì)結(jié)果表明,zs082與Botryosphaeriadothide的同源性為100％。葡萄座腔菌(B.dothidea)即七葉樹(shù)殼梭孢(F.aesculi)的有型階段,與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致。zs085與P.glomer

5、ata的同源性為100％。結(jié)合形態(tài)鑒定,將zs085鑒定為:頭狀莖點(diǎn)霉(P.glomerata)。zs091與其細(xì)極鏈格孢Alternariatenuissima和A.alternate的同源性均為100％,A.alternate與zs091形態(tài)學(xué)一致。為了進(jìn)一步明確zs082的分類地位,我們測(cè)定了其EF1-a基因序列,與其同源性99％的序列均為B.dothidea,與ITS序列比對(duì)結(jié)果一致。病原菌zs09b2的16SrDNA序列經(jīng)比對(duì)

6、后與其同源性99％以上的序列,皆屬于芽孢桿菌屬。其16-23SITSrDNA序列比對(duì)結(jié)果表明與B.amyloliquefatciens的同源性為100％,與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致。
　　 5.為了解棗樹(shù)內(nèi)生真菌的種類和分布情況,采用常規(guī)分離方法,從整個(gè)生育期不同品種健康棗樹(shù)的樹(shù)皮、棗股、枝條、花、葉、果實(shí)中分離獲得內(nèi)生真菌1511株,共鑒定出15個(gè)真菌屬,其優(yōu)勢(shì)屬為鏈格孢屬(Alternaria)、莖點(diǎn)霉屬(Phoma)、毛殼菌屬(

7、(Chaetomium)和黑孢霉屬(Nigrospora)。結(jié)果表明健康棗樹(shù)組織中內(nèi)生真菌分布普遍,種類豐富；不同生育期,不同部位內(nèi)生真菌的種類和數(shù)量都有所差異。通過(guò)棗樹(shù)不同生育期、不同組織和不同品種的內(nèi)生鏈格孢種的鑒定發(fā)現(xiàn)其優(yōu)勢(shì)內(nèi)生鏈格孢種為鏈格孢(Alternariaalternata(Fr.)Keissler,),與病原鏈格孢是同種。初步確定棗縮果病病原鏈格孢可能在棗樹(shù)體內(nèi)具有長(zhǎng)期潛伏特性,為棗樹(shù)病原鏈格孢的侵染規(guī)律研究奠定了基礎(chǔ)