玉米細菌性葉斑病病原菌的分離與特性鑒定.pdf

1、目前已報道的玉米細菌性病害有13種，多表現(xiàn)為細菌性葉斑癥狀。本研究分離了國內不同玉米產(chǎn)區(qū)玉米細菌性葉斑病的疑似致病菌，通過致病性測定，確定了一株玉米細菌性葉斑病致病菌株。經(jīng)細菌的常規(guī)鑒定與分子鑒定明確了致病菌株為PantoeaananatisSerrano，并根據(jù)該菌株的ITS序列設計了一對特異性引物對其進行快速檢測。主要研究結果如下： 1.分離純化了來自國內不同地區(qū)的57份玉米病葉標本，共篩選到35株細菌。采用多種方法對它們的

2、致病性進行了測定：菌懸液注射接種煙草結果表明，35株菌株中有20株具有毒性；苗期噴霧接種試驗表明，從津、京、冀地區(qū)天塔8號品種上分離到的菌株TJ-1-1、BJ-3-1、HB-1-1可引起相似的細菌性葉斑病癥狀，從回接發(fā)病的病株上分別分離到了菌株T8-TJ、T8-BJ、T8-HB；細菌懸浮液浸種試驗中TJ-1-1、BJ-3-1、HB-1-1也能夠引起玉米細菌性葉斑病癥狀的產(chǎn)生。試驗結果表明，三株細菌菌株對玉米均表現(xiàn)出較強的致病性。同時，根

3、據(jù)致病性測定結果從玉米品種天塔8號種子中分離到一株優(yōu)勢細菌菌株T8-1。 2.通過菌落形態(tài)觀察，鞭毛電鏡觀察，革蘭氏染色試驗等一系列常規(guī)細菌生理生化測試證明TJ-1-1、BJ-3-1、HB-1-1、T8-TJ、T8-BJ、T8-HB、T8-1為同一種細菌-Pantoeaananatis(鳳梨泛菌)。 3.選用16SrDNA通用引物16sF(5'-ATTGAACGCTGGCGGCAGGCCT-3’)/16sR(TCCCTA

4、CGGTTACCTTGTTA-3’)與ITS通用引物L1(5'-AGTCGTAACAAGGTAGCCGT-3’)/L2(5'-GTGCCAAGGCATCCACC-3’)，對從天塔8號罹病玉米種子中分離到的細菌菌株T8-1進行擴增，得到大小約為1500bp(16SrDNA)與500bp(ITS)的DNA片段。對T8-1的16SrDNA序列克隆測序后進行BLAST搜索，結果表明T8-1與鳳梨泛菌Pantoeaananatis(AF36484

5、7)的相似程度最高達98％，可確定為同屬同種細菌。分子鑒定結果同病原細菌常規(guī)鑒定結果相吻合。 4.本試驗擴增并克隆了致病菌株Pantoeaananas的ITS序列(目前尚未有該菌ITS序列的相關報道)。通過對其ITS序列分析，并與其余供試菌株的ITS序列比對，獲得了該菌株的特異性引物片段P1作為上游引物，同時設計了一段位于23SrRNA基因保守區(qū)的序列P2作為下游引物。GeneBank的BLAST搜索及供試菌株的擴增結果表明：引