玉米細菌性葉斑病病原菌鑒定與分子檢測.pdf

1、玉米細菌性葉斑病是指由幾類細菌引起的玉米多種葉部斑點病的總稱，病原菌種類和病害癥狀均表現出多樣性。近幾年來，該病有逐年加重的趨勢，感病品種既有普通玉米，也有甜糯玉米，據調查，在我國大部分地區(qū)均有發(fā)生。玉米細菌性葉斑病具有傳播快、發(fā)病迅速、控制難度大等特征，已在局部地區(qū)開始影響玉米生產，但是國內外對其的研究卻很少。
　　 本論文通過對菌株的致病性測定和培養(yǎng)性狀的觀察，選擇致病性較強、引起病害較廣泛且嚴重的褪綠斑型癥狀的病原菌開展研

2、究。通過常規(guī)的形態(tài)學觀察和生理生化鑒定、全細胞脂肪酸測定和16S rDNA序列特征分析，將這類菌株鑒定為巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium。同時利用已發(fā)表的特異引物對Pantoea ananatis進行分子檢測。
　　 利用細菌16S-23S rDNA ITS通用引物L1/L2對病原菌B. Megaterium的ITS序列進行擴增，得到大小為125 bp的片段。將所獲片段在NCBI中進行Blast同源序列檢索后，

3、利用引物設計軟件premier5.0 設計出特異性引物BaF1/ BaR1。該引物只能從目標菌中擴增出1條大小為125 bp的產物，非B. Megaterium的參試菌株均無擴增條帶，表明該引物具有很高的特異性。利用該引物檢測B. Megaterium的菌懸液和基因組DNA的靈敏度分別達到了3×104 CFU/mL和6 pg/ μL，從而建立了B. Megaterium的分子快速檢測體系，在實踐中僅用特異性引物BaF1/ BaR1即可對

4、B. Megaterium進行檢測。
　　 從保存的玉米細菌性葉斑病分離物中，將與B. Megaterium和P. Ananatis菌落形態(tài)和培養(yǎng)性狀相似的菌株挑選出來，其中用特異引物BaF1/ BaR1將分離自浙江、海南和云南的10株菌擴增出125 bp的特異性條帶，鑒定為B. Megaterium；而用特異引物PanITS2-1F/PanITS2-1R將分離自浙江、海南和北京的其他7株菌擴增出363 bp的特異性條帶，鑒定為