黑龍江省玉米彎孢霉葉斑病病原種類(lèi)鑒定及遺傳多樣性分析.pdf

1、玉米彎孢霉葉斑病是一種嚴(yán)重影響玉米產(chǎn)量及品質(zhì)的病害，在黑龍江省已由曾經(jīng)的次要病害上升為主要病害。為明確玉米彎孢霉葉斑病在黑龍江省的分布、病菌種類(lèi)、毒性分化及遺傳多態(tài)性，本試驗(yàn)于2014年、2015年對(duì)黑龍江省哈爾濱市、綏化市、大慶市、齊齊哈爾市、佳木斯市、牡丹江市、雞西市、七臺(tái)河市、黑河市以及伊春市10個(gè)地區(qū)的玉米彎孢霉葉斑病進(jìn)行了病原鑒定，研究了病菌的毒性分化以及遺傳多樣性，試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)從采集的病葉上分離獲得156

2、個(gè)致病菌株，經(jīng)形態(tài)及分子鑒定，確定4種病原菌分別是:新月彎孢C.lunata、不等彎孢C.inaequalis、棒狀彎孢C.clavata以及蒼白彎孢C.pallescens。其中C.lunata87株，占總數(shù)的55.8％;C.Clavata23株，占總數(shù)的14.7％;C.Inaequalis26株，占總數(shù)的16.8％;C.pallescens20株，占總數(shù)的12.8％。新月彎孢C.lunata致病性最強(qiáng)，為黑龍江省優(yōu)勢(shì)種。
　　

3、(2)在10個(gè)玉米品種(系)中篩選出先玉335、鵬城9號(hào)、墾粘、黃早4、德美亞2號(hào)為玉米彎孢霉葉斑病菌生理小種鑒定的鑒別寄主。根據(jù)5個(gè)鑒別寄主對(duì)4種玉米彎孢霉葉斑病菌抗感反應(yīng)的不同，將新月彎孢菌劃分為15個(gè)生理小種(CL1～CL15)，優(yōu)勢(shì)小種為C L2;棒狀彎孢菌分為12個(gè)生理小種(CC1～CC12)，優(yōu)勢(shì)小種為CC2、CC11;不等彎孢菌分為11個(gè)生理小種(CI1～CI11)，優(yōu)勢(shì)小種為CI2、CI9;蒼白彎孢菌分為8個(gè)生理小種(C

4、P1～CP8)，優(yōu)勢(shì)小種為CP6、CP7。4種玉米彎孢霉葉斑病菌于不同地區(qū)的優(yōu)勢(shì)生理小種存在明顯差異。
　　(3)對(duì)SSR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)體系為:0.2mmol/L dNTP2.0μL，2.0μmol/L引物1.0μL，30ng/μL模板DNA，2.5U/μL Taq DNA聚合酶0.5μL，10×Buffer3.0μL,ddH2O11.5μL。
　　(4)選取10對(duì)SSR引物在156株玉米彎孢霉葉斑病菌株中共

5、擴(kuò)增出43個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)共30個(gè)，多態(tài)性位點(diǎn)比例為69.8％?；蚨鄳B(tài)性位點(diǎn)主要分布在450bp～650bp之間，550bp～600bp區(qū)間基因分布頻率較大，有效等位基因在1.9318～1.9434之間，期望雜合度在0.4831～0.4845之間，Shannon信息指數(shù)在0.6703～0.6751之間。聚類(lèi)分析得知，同一種菌同一地區(qū)的不同菌株，未歸于一個(gè)類(lèi)群;同一種菌同一生理小種的不同菌株，也未歸于一個(gè)類(lèi)群，黑龍江省玉米彎孢霉葉