玉米彎孢葉斑病菌致病相關(guān)因子的研究.pdf

1、本文通過(guò)對(duì)采自遼寧省各地區(qū)的新月彎孢菌(Curvularialunata(Wakker)Boedijn)菌株的可溶性蛋白電泳圖譜聚類分析，表明新月彎孢菌存在著豐富的遺傳多樣性。進(jìn)而利用雙向電泳、PDQuest2-D分析軟件和質(zhì)譜分析技術(shù)(以MALDI-TOF-MS為主)，系統(tǒng)研究了中國(guó)玉米彎孢葉斑病菌致病性分化相關(guān)蛋白質(zhì)組，同時(shí)研究了玉米彎孢葉斑病菌致病相關(guān)因子黑色素的理化性質(zhì)，明確了黑色素在玉米彎孢葉斑病菌致病性中的作用。主要內(nèi)容包括

2、： 1．建立了適用于玉米彎孢葉斑病菌菌絲全蛋白分離的2-DE優(yōu)化技術(shù)體系。最佳蛋白質(zhì)裂解液成份包括8M尿素、2M硫尿、100mM DTT、4％CHAPS、10mM PMSF、10％異丙醇、0.25％Tween-20、40mM Tris、0.25％兩性電解質(zhì)、5％甘油和0.002％溴酚藍(lán)；制備型蛋白質(zhì)凝膠染色液以0.25％G250的CBB染色效果最佳；聚丙烯酰胺凝膠濃度為12.5％時(shí)分離效果最佳；等電聚焦為24000vh為2-DE

3、的最佳條件。 2．比較分析了玉米彎孢葉斑病菌強(qiáng)致病菌株(CX-3，SD-60、C-152)和弱致病菌株(DD-60、WS-18、C107-1)蛋白質(zhì)圖譜的差異。共獲得423個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中有75個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，28個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)是強(qiáng)致病菌中所特有的，8個(gè)是弱致病菌所特有的，39個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在兩種致病類型中均存在，但是蛋白質(zhì)表達(dá)豐度不同；通過(guò)MALDI-TOF-MS鑒定出20個(gè)差異蛋白，鑒定出3種強(qiáng)致病性特異性圖譜標(biāo)記(檸檬酸合成酶、h

4、omothallicswitch endonuclease、rDNA復(fù)制相關(guān)蛋白)，同時(shí)鑒定出與強(qiáng)致病性相關(guān)的三種高豐度表達(dá)的蛋白(Bml，UBSR1和HSP70)；還鑒定出參與病菌物質(zhì)代謝、能量代謝、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白及功能未知蛋白。在這些蛋白中，Brn1蛋白是參與病原菌黑色素合成且與致病性相關(guān)的蛋白。 3．研究了玉米彎孢葉斑病菌黑色素的理化性質(zhì)。采用酸堿沉淀浸提法提取了彎孢菌胞內(nèi)及胞外黑色素，比較了二者的理化性質(zhì)；采用紫外光譜