大氣壓非平衡等離子體對(duì)牙齦卟啉單胞菌的作用及其生物安全性評(píng)價(jià).pdf

1、背景和目的：
　　 臨床上治療牙周病和種植體周圍炎的方法很多且各有優(yōu)缺點(diǎn)，但目前為止沒有一種理想的治療方法，同時(shí)等離子體技術(shù)因其固有的優(yōu)勢(shì)而越來(lái)越受到研究者的關(guān)注，本課題組早期的研究也證實(shí)常溫大氣壓非平衡等離子體在治療口腔疾病上有很大的潛力，本課題研究目的即研究常溫大氣壓非平衡等離子體殺滅牙周優(yōu)勢(shì)致病菌效果及通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞試驗(yàn)研究其生物安全性。
　　
　　 材料和方法：
　　 本課題利用千赫茲脈沖直

2、流電源驅(qū)動(dòng)的常溫大氣壓非平衡等離子體，工作氣體為He氣或He＋O2（比例2：0.02），參數(shù)為10KHz,1600ns,8Kv。
　　 1、用不同工作氣體的等離子體處理培養(yǎng)皿上的牙周優(yōu)勢(shì)致病菌牙齦卟啉單胞菌（ATCC33277），觀察抑菌圈大小并利用透射電鏡觀察細(xì)菌表面形貌變化；處理蓋玻片上牙齦卟啉單胞菌生物膜，Dead\Live熒光染色后用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察殺滅細(xì)菌情況。
　　 2、用工作氣體為He＋O2的等離子

3、體處理兔頰粘膜和舌粘膜，處理當(dāng)天及處理后觀察五天處死，通過(guò)臨床癥狀觀察和病理切片評(píng)分評(píng)價(jià)其對(duì)粘膜的刺激強(qiáng)度。
　　 3、選鼠成骨細(xì)胞系（MC3T3-E1）做為處理對(duì)象，模擬正常細(xì)胞或牙周手術(shù)中暴露在外的細(xì)胞生理環(huán)境，細(xì)胞處理前在細(xì)胞表面加一層DMEM液，用工作氣體為He＋O2的等離子體處理，以不加DMEM處理組或不做任何處理的空白對(duì)照組做為本實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組，通過(guò)MTT法、AO/EB熒光染色法和流式細(xì)胞儀法，觀察APNPs對(duì)成骨細(xì)胞

4、活性影響。
　　
　　 結(jié)果：
　　 1、等離子體殺滅PG實(shí)驗(yàn)中，觀察到明顯的抑菌圈，透射電鏡觀察到PG細(xì)胞破裂、死亡，等離子體處理蓋玻片上的生物膜5min就可以在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察到整個(gè)視野的生物膜中的細(xì)菌顯示黃色或紅色（細(xì)菌已死亡）。
　　 2、粘膜刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，兔在用APNPs處理后處死前，臨床觀察并未有粘膜充血、紅腫、潰瘍和糜爛等病變癥狀，處死后病理切片觀察并評(píng)分，當(dāng)天處死組為﹣0.8

5、3，飼養(yǎng)五天組為﹣0.67，粘膜刺激強(qiáng)度均為無(wú)。
　　 3、細(xì)胞試驗(yàn)中，加DMEM后，APNPs處理0.5min、1.0min、1.5min，細(xì)胞相對(duì)增殖率為109.5％，103.2％,105.7％（P＞0.05），每?jī)山M間無(wú)顯著性差異；加DMEM組和空白對(duì)照組活細(xì)胞所占百分比為96.56±2.60％，95.56±1.12％（P＞0.05），兩組無(wú)顯著性差異，AO/EB染色后，兩組細(xì)胞均顯示綠色熒光（為活細(xì)胞所發(fā)熒光）。