胰腺腫瘤分子生物學(xué)的相關(guān)性研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文胰腺腫瘤分子生物學(xué)的相關(guān)性研究姓名：李勝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：李占元20030315論文一CO自殺基因和免疫因子基因(IL18、GhICSF)重組表達(dá)的研究研究生李勝導(dǎo)師李占元教授中文摘要目的：利用基因重組技術(shù)構(gòu)建人IL一18(rhlL18)的真核表達(dá)載體pORF5一hlL～18、pVITR02一IL一18、pVITR02CD—IL一18及pVITR02一CDGM—CSF，并在大腸桿菌中表達(dá)，以檢測(cè)

2、其生物學(xué)作用以及特點(diǎn)，初步探討其對(duì)腫瘤防治的作用。方法：從外周血細(xì)胞提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到IL18的eDNA，利用分子克隆的方法依次構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pORF5hlL一18、pVITR02一IL一18、pVITR02一CD、pVITR02CD—IL一18及pVITR02cD書(shū)McsF：利用IPTG誘導(dǎo)成功轉(zhuǎn)染pORF5一hIL—18質(zhì)粒的大腸桿菌JMl09表達(dá)rhlL一18；利用SDSPAGE法鑒定，同時(shí)利用NiS04飽和的HisBin

3、dResin純化rhIL一18的蛋白產(chǎn)物；采用ELISA測(cè)定rhll，一18以及rhlL一2對(duì)正常人外周血單核細(xì)胞(PBMc)表達(dá)粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)的刺激作用：利用共培養(yǎng)方法檢測(cè)rhlL18及對(duì)NI(細(xì)胞細(xì)胞毒活性的影響。結(jié)果：真核表達(dá)質(zhì)粒pORF5hlL一18、pVITR02IL—18、pVITR02一CD、pVITR02一CD—IL—18及pVITR02_cD—黼一csF構(gòu)建成功；真核表達(dá)質(zhì)粒pORF5hlL18