孟加拉紅介導的光動力療法對牙齦卟啉單胞菌抑制作用的研究.pdf

1、目的:
　　光動力療法(PDT)是光敏劑和特定波長激光之間的非熱能光化學反應,在反應的過程中會產生單線態(tài)氧及氧自由基,從而對細胞產生不可逆的毒性作用。本研究通過在體外環(huán)境下利用菌懸液及構建細菌生物膜模型,初步檢測及觀察RB介導的PDT(RB-PDT)對牙齦卟啉單胞菌(P.g)的抑制作用,從而為RB-PDT預防和治療牙周炎的臨床應用提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法:
　　(1)應用不同濃度的RB在波長為490nm的 LED

2、光源激發(fā)作用下,觀察其對 P.g菌懸液的抑制效果。實驗分成兩組:對照組(0.9％生理鹽水)和 PDT組(RB濃度分別為50μM,20μM,10μM,5μM,1μM,共培養(yǎng)5分鐘,LED燈光照3分鐘)。處理完成后采用十倍稀釋法稀釋菌懸液后繼續(xù)培養(yǎng)48小時。菌落計數(shù)法得出原菌液的菌落形成單位,并進行統(tǒng)計分析。
　　(2)利用96孔板建立 P.g的48小時成熟生物膜模型,采用 MTT法檢測RB-PDT組(50μM),單純光照組,單純 R

3、B組及生理鹽水組作用后 P.g生物膜的吸光度值,比較各組之間的差異;
　　(3)使用激光共聚焦專用培養(yǎng)皿建立 P.g的48小時成熟生物膜模型,采用SYT09/PI熒光染色劑使細菌著色,利用激光共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察各藥物處理組(RB-PDT組(50μM),單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組)生物膜中細菌染色情況及死菌活菌比例。
　　結果:
　　(1)菌落平板計數(shù)法顯示RB-PDT組(RB濃度分別為50μM,20

4、μM,10μM,5μM,1μM)與生理鹽水對照組相比,P.g菌落數(shù)(CFU/ml)有顯著減少(P<0.05),且五個不同濃度的 RB-PDT組之間相互比較發(fā)現(xiàn) P.g的菌落數(shù)隨著 RB濃度的增加而減少;
　　(2)MTT檢測結果顯示 RB-PDT組(50μM)與單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組比較差異均有顯著性(P<0.05),而單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組之間差異無顯著性(P>0.05);
　　(3)CLSM圖

5、像顯示RB-PDT組可見P.g菌體染色以紅色(死菌)熒光為主,僅少量菌體染色為綠色(活菌)熒光,同一視圖疊加后以紅色熒光為主,而單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組鏡下菌體菌體染色以綠色(活菌)熒光為主,僅少量菌體染色為紅色(死菌)熒光,同一視圖疊加后以綠色熒光為主。
　　結論:
　　(1)RB-PDT對P.g菌懸液具有明顯的抑制和破壞作用,且RB-PDT的抑制作用有濃度相關性;
　　(2)P.g的菌斑生物膜構建成功,