MMP14與卡波氏肉瘤相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：本研究旨在利用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)方法檢測(cè)MMP14基因在卡波氏肉瘤（Kaposi's Sarcoma，KS）中的表達(dá)水平，初步研究其在KS發(fā)病中的作用及與KSHV感染的關(guān)系，明確其在KS發(fā)病中的可能機(jī)制。 方法：收集23例新疆KS患者腫瘤組織、以及17例非KS患者的正常皮膚組織樣本作為對(duì)照，分別采用Real-time PCR和免疫組化技術(shù)，從mRNA和蛋白水平檢測(cè)樣本中MMP14表達(dá)情況；利用基因重組技術(shù)構(gòu)建MMP14

2、真核表達(dá)載體，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），用western-blot鑒定轉(zhuǎn)染48小時(shí)后含外源性MMP14的細(xì)胞株，并觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的形態(tài)變化，用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖率等生物學(xué)特征變化；通過(guò)Transwell檢測(cè)MMP14對(duì)細(xì)胞遷移的影響；使用MMP14的抑制劑GM6001抑制MMP14的表達(dá)，檢測(cè)KSHV感染的HUVEC細(xì)胞中MMP14蛋白與VEGF蛋白表達(dá)變化的關(guān)系。 結(jié)果：（1）6例KS患者組織中M

3、MP14基因的mRNA表達(dá)水平的最高值是5.5329，最低值是0.93027，平均表達(dá)水平為2.640±1.861，而6例正常皮膚組織中mRNA的表達(dá)水平最高值為2.4719，最低值為0.76075，平均表達(dá)水平為1.470±0.615，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差組間不齊，進(jìn)行近似t檢驗(yàn)，t＝1.462，p=0.193，p>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）免疫組化結(jié)果顯示MMP14蛋白在KS患者組織中陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常皮膚組織，差異有顯著

4、性意義（X2=20.70，P<0.01），MMP14蛋白陽(yáng)性反應(yīng)程度在兩組中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.407，P<0.01）。（3）成功構(gòu)建了MMP14基因的真核表達(dá)載體，將構(gòu)建的重組體轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC細(xì)胞48h后，檢測(cè)有外源性MMP14蛋白的表達(dá)，增殖率檢測(cè)結(jié)果顯示不同轉(zhuǎn)染時(shí)間和不同轉(zhuǎn)染濃度轉(zhuǎn)染MMP14重組體組與其他對(duì)照組相比增殖率明顯增高，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。（4）轉(zhuǎn)染MMP14重組體后，與轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)

5、染組相比，MMP14明顯促進(jìn)HUVEC細(xì)胞的遷移（55.4±2.9，12.4±1.1，12.4±0.5）。（5）抑制MMP14的表達(dá)，可以引起KSHV感染的HUVEC細(xì)胞里的VEGF蛋白的表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論：（1）.MMP14基因在KS組織和正常皮膚組織mRNA表達(dá)水平無(wú)差異和蛋白表達(dá)水平增高。（2）.MMP14基因過(guò)表達(dá)能促進(jìn)HUVEC細(xì)胞的增殖和遷移。（3）.MMP14基因在KSHV感染的細(xì)胞中調(diào)節(jié)與腫瘤血管生成有關(guān)的血管內(nèi)皮