DNA-PKCs與骨肉瘤化療耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 研究人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞系化療與DNA-PKCs表達(dá)的相關(guān)關(guān)系，監(jiān)測(cè)人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞應(yīng)用化療藥物順鉑（DDP）、DNA-PKCs抑制劑wortma-nnin及兩者合用后細(xì)胞活性的變化及DNA-PKCs的表達(dá)差異，探討DNA-PKCs抑制劑wortmannin在人骨肉瘤化療中的意義，以及應(yīng)用DNA-PKCs抑制劑如wortmannin處理人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的影響。
　　 方法：

2、
　　 采用噻唑鹽比色法（MTT）檢測(cè)并比較人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞株對(duì)順鉑（DDP）、DNA-PKCs抑制劑wortmannin及兩者合用的藥物敏感性，利用倒置顯微鏡觀察用藥干預(yù)前后細(xì)胞一般大體形態(tài)改變；利用蛋白印跡（Westernblot）技術(shù)檢測(cè)DNA-PKCs蛋白在人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞應(yīng)用化療藥物順鉑（DDP）、DDP+wortmannin分別培養(yǎng)細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 本實(shí)

3、驗(yàn)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，以不同濃度梯度的DDP、Wortmannin及DDP+Wortmannin（兩藥物濃度梯度同前不變）三組分別干預(yù)人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞株48 h后，每組該細(xì)胞的增殖受抑，呈劑量依賴性，隨藥物濃度的增大，OD值明顯減少，且與對(duì)照組相比存在顯著性差異（P<0.05），其三組間細(xì)胞的增殖受抑程度DDP+Wortmannin>DDP>Wortmannin，順鉑和Wortmannin兩者合用誘導(dǎo)人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞凋

4、亡而抑制了腫瘤的增殖較其它兩組顯著，DDP、Wortmannin分別與DDP+Wortmannin進(jìn)行組間比較，兩樣本t檢驗(yàn)均（P<0.05）。根據(jù)前一步的細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果，選用適當(dāng)濃度DDP、DDP+Wortmannin兩組分別處理人骨肉瘤U2-OS細(xì)胞48小時(shí)后，利用蛋白印跡（Western blot）技術(shù)檢測(cè)DNA-PKCs蛋白表達(dá)，結(jié)果兩組細(xì)胞內(nèi)DNA-PKcs蛋白的表達(dá)均下調(diào)，尤以后者顯著，且與對(duì)照組兩兩組間比較t檢驗(yàn)（P<0

5、.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1本試驗(yàn)表明DNA-PKCs抑制劑Wortmannin可以增強(qiáng)順鉑殺傷骨肉瘤細(xì)胞的作用，促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡，Wortmannin在人骨肉瘤U2-OS細(xì)胞對(duì)順鉑化療過(guò)程中起到了增敏作用。
　　 2在分子水平進(jìn)一步探討人骨肉瘤U-2 OS細(xì)胞對(duì)順鉑化療耐藥機(jī)制，提示骨肉瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐藥與DNA-PKcs的高表達(dá)有關(guān)，驗(yàn)證了DNA-PKCs的表達(dá)可能與骨肉瘤的預(yù)后相關(guān)的觀點(diǎn)。