胃癌中ERCCI、DNA-PKcs蛋白的表達(dá).pdf

1、胃癌是我國(guó)常見的消化系腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。就發(fā)病率和死亡率而言，胃癌在我國(guó)居惡性腫瘤第二位。胃癌的發(fā)生是多因素、多基因參與的復(fù)雜過(guò)程，內(nèi)外環(huán)境致癌物所導(dǎo)致的DNA損傷得不到有效修復(fù)而引起基因突變的累積是胃癌發(fā)病的重要原因之一，DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)在修復(fù)基因、維持基因組穩(wěn)定性及拮抗癌變中起著重要作用。已有的研究結(jié)果顯示：ERCCI(修復(fù)交叉互補(bǔ)基因Ⅰ，excision repair cross—complementing geneⅠ)、

2、DNA-PKcs(DNA依賴性蛋白激酶，DNA dependent protein kinase catalytic subunit)是重要的DNA損傷修復(fù)因子，在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用。本研究的目的是通過(guò)組織芯片技術(shù)探討DNA修復(fù)因子ERCCI，DNA-PKcs蛋白在胃癌中表達(dá)的臨床意義。 材料與方法: 收集中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及2007年2月～2008年2月手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本(術(shù)前未行化療)124例，年齡2

3、9～85歲，中位年齡60.1歲，病理均為腺癌，按分化程度：高分化85例，中分化34例，低分化5例；TNM分期，具體分為：Ⅰ期17例，Ⅱ期46例，Ⅲ期61例，另24例距胃癌組織5厘米以遠(yuǎn)的正常胃組織作為對(duì)照。采用免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測(cè)上述胃癌及癌旁正常組織中ERCC1、DNA-PKcs蛋白的表達(dá)。濃縮型鼠抗人ERCCI，DNA-PKcs單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Neomarkers公司，工作濃度為1:100；SP試劑盒和DAB顯色試劑盒購(gòu)

4、自福州邁新生物技術(shù)公司；組織芯片經(jīng)微波抗原修復(fù)后，按SP免疫組化試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行染色。已知陽(yáng)性切片在同一條件下染色作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。 結(jié)果判定: ERCCI、DNA-PKcs以胞核中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒定為陽(yáng)性染色。每個(gè)組織點(diǎn)隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。不著色或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10％定為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10％既定為陽(yáng)性[1]，每例均取兩點(diǎn)的平均值。 統(tǒng)

5、計(jì)分析方法： 以SPSS V13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用四格表X2檢驗(yàn)、SPearman秩相關(guān)檢驗(yàn)和Fisher精確計(jì)算概率法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 一、ERCCI、DNA-PKcs在胃癌及癌旁組織中的表達(dá) ERCCI在124例胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.6％(100/124)、為高表達(dá)；在癌旁組織中表達(dá)率為66.7％(16/24)。ERCCI在胃癌組織和癌旁組織的表達(dá)無(wú)

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=0.699，P=0.403)。DNA-PKcs在124例胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率67.7％，(84/124)，在癌旁組織中表達(dá)率為33.3％(8/24)，DNA-PKcs在胃癌組織和癌旁組織的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=3.026，P=0.082)。 二、ERCCI、DNA-PKcs表達(dá)與分化程度及臨床分期 ERCCI的表達(dá)與胃癌分化程度無(wú)關(guān)(X2=4.073，P=0.667)，與臨床分期有關(guān)(X2=13.

7、081，P=0.042)。DNA-PKcs的表達(dá)與胃癌分化程度無(wú)關(guān)(X2=2.477，P=0.871)，與臨床分期無(wú)關(guān)(X2=4.466，P=0.614)。 三、ERCCI、DNA-PKcs表達(dá)的相關(guān)性 ERCCI、DNA-PKcs表達(dá)之間無(wú)相關(guān)性(t=4.287，P=0.038<0.05)。 討論: DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)在修復(fù)基因、維持基因組穩(wěn)定性及拮抗癌變中起著重要作用。已有的研究結(jié)果顯示：ERCCI、

8、DNA-PKcs是重要的DNA損傷修復(fù)因子，在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用。環(huán)境因素和遺傳因素均可導(dǎo)致體細(xì)胞DNA受損。ERCCI主要參與核苷酸切除修復(fù)(NER)，本研究結(jié)果顯示胃癌組織ERCCI陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.6％，高于鄰近癌旁正常胃組織(66.7％)，但無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異((X2=0.699，P=0.403))。ERCCI在肺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于癌旁組織(P<0.05)，這表明癌癥的發(fā)生與

9、ERCCI基因表達(dá)低下存在一定的關(guān)聯(lián)。而在本研究ERCCI表達(dá)與腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(X2=4.073，P=0.667)，與臨床分期有關(guān)(X2=13.081，P=0.042)，臨床分期越晚，ERCCI表達(dá)的陽(yáng)性率越低，表明ERCCI低表達(dá)與腫有瘤的惡化程度有關(guān)。在其他研究中，ERCCI表達(dá)與食管賁門癌組織分化程度呈正相關(guān)，也有研究表明ERCCI的表達(dá)與肺癌分化程度、T分期和臨床分期呈負(fù)相關(guān)。綜上所述，ERCCI可考慮作為胃癌的臨床分期診斷的

10、一個(gè)指標(biāo)。 DNA依賴性蛋白激酶(DNA dependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)是唯一由DNA末端激活的真核細(xì)胞激酶，具有絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶活性，可磷酸化多種底物蛋白，在細(xì)胞周期、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、凋亡和轉(zhuǎn)錄調(diào)控等細(xì)胞學(xué)中發(fā)揮著重要功能。本實(shí)驗(yàn)中DNA-PKcs在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為69.4％，為高表達(dá)，與癌旁組織中的表達(dá)相近(P>0.05)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的

11、差異。有研究表明DNA-PKcs在肺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常肺組織，也有報(bào)道在人類結(jié)腸癌中DNA-PKcs的表達(dá)水平低或不表達(dá)。DNA-PKcs在胃癌組織中的與組織分化程度及臨床分期均無(wú)關(guān)。DNA-PKcs的表達(dá)與肺癌分化程度和臨床分期不相關(guān)。DNA-PKcs過(guò)度表達(dá)與星形細(xì)胞瘤分化和預(yù)后密切相關(guān)，能夠客觀的反映腫瘤增生分化和惡性程度，可以作為判斷星形細(xì)胞瘤分化和預(yù)后有價(jià)的參考指標(biāo)。以上說(shuō)明DNA-PKcs可以考慮作為癌癥檢測(cè)的一

12、個(gè)指標(biāo)，但不能反應(yīng)腫瘤的發(fā)展程度。 本實(shí)驗(yàn)中ERCCI、DNA-PKcs均為高表達(dá)，但是2者未表現(xiàn)出相關(guān)性，目前關(guān)于ERCCI、DNA-PKcs的兩者的相關(guān)性研究較少，需要進(jìn)一步的探索研究。 結(jié)論: 1、本實(shí)驗(yàn)中ERCCI、DNA-PKcs在胃癌均為高表達(dá)，但是兩者在胃癌組織和癌旁組織的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2、ERCCI的表達(dá)與胃癌分化程度無(wú)關(guān)、與臨床分期有關(guān)(X2=13.081，P=0.042)。DNA