香蘭素衍生物抑制DNA-PKcs活性和抗癌細胞增殖及其機理研究.pdf

1、目的：本研究從香蘭素衍生物中篩選抑制DNA-PKcs活性及抗癌細胞增殖更強的衍生物，且探討其作用機理，旨在發(fā)現新的靶向性抗癌活性化合物。 方法：采用MTY法、細胞克隆形成法和單細胞電泳檢測化合物對細胞增殖活性、輻射敏感性和DNA損傷的影響；以p53蛋白特異肽段作為底物，32T-ATP摻入的磷酸化反應檢測化合物對DNA-PKcs激酶活性的影響；流式細胞術、Hoechst33258熒光染色及DNALadder等檢測細胞凋亡，透射電鏡

2、觀測HepG2細胞自吞噬死亡；用原位免疫熒光雜交和激光共聚焦顯微鏡觀察紡錘體結構；熒光探針標記檢測細胞內ROS變化；Westernblot檢測化合物作用后凋亡相關蛋白和PBK／Akt信號通路相關蛋白變化。 結果：篩選出抑制多種來源癌細胞增殖的香蘭素衍生物BVAN3208，并申請了國家發(fā)明專利；結果表明BVAN3208介導細胞內DNA-PKcs的降解，抑制DNA-PKcs激酶活性；BVAN3208對所測試的近十余種癌細胞有顯著殺傷

3、效應，對正常肝細胞L02和正常人淋巴母細胞的毒性顯著低于癌細胞；BVAN3208誘發(fā)細胞ROS水平增高和DNA損傷，誘發(fā)多種腫瘤細胞G2／M期阻滯及凋亡，破壞紡錘體的結構，誘發(fā)細胞自吞噬死亡和有絲分裂災難性死亡；BVAN3208抑制Akt蛋白磷酸化，影響Akt/GSK3β和Akt／Bad信號通路。 結論：篩選出具有明顯抑制癌細胞增殖和輻射增敏作用的香蘭素衍生物BVAN3208，驗證了BVAN3208作為DNA-PKcs抑制劑是一