DNA復(fù)制起始蛋白在口腔鱗癌中的表達(dá)研究.pdf

1、口腔癌鱗狀上皮較正常鱗狀上皮具有較高的增殖活性，而早期診斷很重要。DNA復(fù)制起始蛋白與細(xì)胞的增殖有關(guān)，它們的過量表達(dá)與細(xì)胞的異常增生和惡性轉(zhuǎn)變有著密切的聯(lián)系。我們研究的目的是確定這些蛋白能否作為口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程的標(biāo)志物，為口腔癌的早期診斷和預(yù)后提供有價(jià)值的信息。我們針對(duì)石蠟切片、口腔脫落細(xì)胞和小鼠組織分別采用了熒光定量PCR和免疫組化的方法，分別從mRNA和蛋白的水平對(duì)目標(biāo)基因的差異表達(dá)做出判斷，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。本文還

2、通過建立小鼠舌鱗狀上皮癌癥的動(dòng)物模型，研究在癌變過程中DNA復(fù)制起始蛋白的變化情況。 在石蠟切片組織中，從輕度不典型增生到鱗癌，DNA復(fù)制起始蛋白的mRNA表達(dá)水平呈上升趨勢(shì)。CDC6和CDC45的表達(dá)與不典型增生和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。CDT1在重度不典型增生樣本中的表達(dá)高于輕度和中度不典型增生樣本。MCM2的表達(dá)與不典型增生、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)有關(guān)。DNA復(fù)制起始蛋白的表達(dá)與腫瘤大小和組織分級(jí)無(wú)關(guān)。線性回歸分析，在臨床分類和DN

3、A復(fù)制起始蛋白的表達(dá)存在相關(guān)性。另外在CDC6和CDT1，MCM2和CDC45之間存在表達(dá)偶聯(lián)。非參數(shù)分析顯示MCM2和CDC45比CDC6和CDT1更具有準(zhǔn)確性?？谇幻撀浼?xì)胞表達(dá)分析的結(jié)果表明，利用DNA復(fù)制起始蛋白可以有效地將正常人與患口腔癌的病人區(qū)別開來，MCM2和CDC6在癌前病變階段的表達(dá)均顯著低于癌變階段脫落細(xì)胞中相應(yīng)基因的表達(dá)，可作為癌前的標(biāo)志物。癌癥術(shù)后階段除CDC6外。其它三個(gè)蛋白在術(shù)后表達(dá)趨于正常，與癌變階段有顯著差

4、異，可以作為預(yù)后的標(biāo)志物。小鼠舌上皮組織中，CDC6蛋白在正常上皮中幾乎沒有表達(dá)，而在輕、中、重度不典型增生到鱗癌發(fā)展過程中，表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，且各組陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)之間有顯著性差異(p<0.05)。MCM7在不典型增生和癌變階段的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于正常組織，癌變組表達(dá)陽(yáng)性指數(shù)顯著高于癌前病變組(p<0.01)。 DNA復(fù)制起始蛋白可以有效地將舌癌前病變與癌區(qū)別開來，因而可作為舌癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物。以4NQO建立的小鼠舌癌模型發(fā)病

5、率高，具有典型的人舌癌病理特征。是研究人口腔病變的良好的模型，另外MCM7和CDC6的表達(dá)符合在人類標(biāo)本中的檢測(cè)結(jié)果。 另外，為了對(duì)高等真核生物復(fù)制起始機(jī)制有更為清楚的認(rèn)識(shí)，我們?cè)卺劸平湍钢胁捎妙伾捅硇妥兓M(jìn)行新的DNA復(fù)制起始蛋白的篩選和鑒定。在釀酒酵母中篩選和鑒定了一個(gè)Cdc28-C1b復(fù)合物的抑制基因Sic1。sic1在第561位堿基發(fā)生G到A的突變，產(chǎn)生了提前終止密碼子，使之后的97個(gè)氨基酸功能缺失，產(chǎn)生DNA復(fù)制起始