夏枯草生物多樣性及化學(xué)成分研究.pdf

1、夏枯草(PrunellavulgarisL)是有清肝、明目、散結(jié)、消腫、止痛等功效的傳統(tǒng)中藥，目前以野生入藥為主。四川是夏枯草的主產(chǎn)區(qū)之一，種質(zhì)資源較為豐富。本文通過植物生物技術(shù)和化學(xué)方法圍繞夏枯草種質(zhì)資源的內(nèi)容開展了夏枯草生物多樣性及化學(xué)成分研究，這為夏枯草藥材規(guī)范化種植，合理評價藥材質(zhì)量打下基礎(chǔ)。 本文分別建立了夏枯草的兩種分子標記技術(shù)一一RAPD(RandomamplificationpolymorphismDNA，RAP

2、D)和AFLP(Amplifiedfragmentlengthpolymorphism，AFLP)的實驗方法，并優(yōu)選一種技術(shù)對采自四川省不同地區(qū)的夏枯草樣品進行生物多樣性分析；建立了反相高效液相色譜法同時測定夏枯草中熊果酸和齊墩果酸含量的方法，并用此方法測定不同采收時間和采收部位的熊果酸和齊墩果酸含量的差異：以夏枯草的短縮莖段作為培養(yǎng)材料對夏枯草進行組織培養(yǎng)，觀察其組培生長情況、生根情況及增殖情況，同時進行有效成分熊果酸和齊墩果酸含量檢

3、測，以篩選最適宜夏枯草組培生長的培養(yǎng)基。 結(jié)果表明，RAPD方法檢測出來的夏枯草變異程度太小，不能進行后續(xù)的聚類分析等步驟。而AFLP方法的檢測效率高，分辨率和重復(fù)性都很好，用于分析四川省各地的夏枯草樣本可觀察到682條條帶，其中多態(tài)性位點數(shù)為131，多態(tài)性位點比例為95．62﹪。結(jié)合AFLP的擴增產(chǎn)物多態(tài)性分析及聚類分析，可將四川省各地的夏枯草種質(zhì)劃分為兩大類。 篩選出HPLC測定夏枯草有效成分熊果酸和齊墩果酸的的實驗

4、條件：流動相為乙腈一甲醇-0．5﹪乙酸銨．三乙胺(60：15：25：0．025，V)，流速1.0mL．min-I，檢測波長215nlil，柱溫30℃；并測得4月份采集的夏枯草樣品中熊果酸和齊墩果酸的含量最高，分別為1.6437mg．g～、0．6056mg．g-I；比較這兩種物質(zhì)在4月夏枯草的花序、葉片、莖和全草中的含量，發(fā)現(xiàn)花序中的含量最高，分別為1.6891mg．g-1、0．6097mg．g-1。 夏枯草組織培養(yǎng)實驗選擇處于生