離體血腦屏障模型的建立.pdf

1、血腦屏障(BBB)是隔離中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周組織的生理性屏障，大多數(shù)的小分子物質(zhì)和幾乎所有的大分子物質(zhì)都無(wú)法穿越BBB入腦。因此BBB是中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物開(kāi)發(fā)的主要限制因素。由于在體狀態(tài)下對(duì)BBB的研究存在技術(shù)困難，建立BBB體外模型(BBBM)，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的研發(fā)有重要意義。 本文的目的在參閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，建立一種由腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)，具有良好的形態(tài)和結(jié)構(gòu)功能，便于大量培養(yǎng)和復(fù)制的體外血腦屏障模型。實(shí)驗(yàn)方法

2、：首先，通過(guò)勻漿，過(guò)濾，密度梯度離心，膠原酶消化等步驟分離SD新生大鼠的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，第二步，分離大鼠大腦皮質(zhì)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，最后，將兩種細(xì)胞分別接種于多孔濾膜的兩面進(jìn)行共培養(yǎng)。模型建立后，通過(guò)跨細(xì)胞膜電阻(TEER)的測(cè)量以及通透性測(cè)試等對(duì)模型的功能特點(diǎn)進(jìn)行評(píng)估。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)對(duì)分離的腦微血管內(nèi)皮進(jìn)行了形態(tài)觀察，并對(duì)生長(zhǎng)曲線進(jìn)行了測(cè)定，細(xì)胞在培養(yǎng)7-9天后顯示了典型的“鋪路石”樣形態(tài)并形成細(xì)