人胎肝來源pact等重要功能基因的基因打靶研究

1、Y802783分類號(hào)UDC密級(jí)博士學(xué)位論文題目厶臉旺塞近墜晝工笠重要功能基國(guó)數(shù)基國(guó)扛塑班究作者姓名一奎左指導(dǎo)教師一賀福扭院揚(yáng)曉班莖五雖培養(yǎng)單位一莖皇醫(yī)堂型堂院越魁量揎蘊(yùn)醫(yī)堂班究壓專業(yè)名稱一紲胞生物堂論文提交日期一墊Q墨生壘且圣目：學(xué)位授予單位蟲國(guó)厶醫(yī)鯉越笙堊壹醫(yī)堂越堂院中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院制軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文摘要肝臟是人體內(nèi)多種物質(zhì)代謝的主要器官，具有重要的生理功能。4—6月孕齡的人胎肝還是造血、免疫系統(tǒng)干祖細(xì)胞的主要來

2、源，其中可能存在大量具有重要功能的新基因。本室通過胎肝大規(guī)模cDNA測(cè)序已經(jīng)建立了22周孕齡人胎肝基因表達(dá)圖譜，同時(shí)正在進(jìn)行從胎肝中大規(guī)模發(fā)掘重要功能新基因的探索，包括PACT、HPO、CKIP一1、NPDC一1、LMBP等。基因打靶技術(shù)是一種通過同源重組按預(yù)期方式對(duì)靶基因進(jìn)行定點(diǎn)修飾而改變生物活體遺傳信息，進(jìn)而觀察相應(yīng)基因功能的實(shí)驗(yàn)手段。應(yīng)用此技術(shù)，我們共構(gòu)建成功了上述5種基因的打靶載體，并將打靶載體導(dǎo)入小鼠胚胎干細(xì)胞，篩選獲得了PA

3、cT、H：PO、cⅪP13種基因的中靶細(xì)胞。各自的基因型均已經(jīng)過PCR和Soumem印跡法鑒定。通過囊胚顯微注射技術(shù)，我們獲得了PAcT、HPO、CⅪP13種基因的嵌合體小鼠。其中HPO、cⅪP1這2種基因的嵌合體小鼠不能將突變等位基因遺傳至子代。而PAcT嵌合體小鼠中的突變等位基因可以遺傳至子代，獲得了可存活、可繁殖、表型正常的PAcT雜合體小鼠。將PAcT雜合體小鼠自交，在子代中未發(fā)現(xiàn)PACT純合體小鼠。根據(jù)野生型與雜合型小鼠數(shù)目約

4、1：2的比例，推測(cè)其可能在胚胎期純合致死。我們對(duì)PAcT雜合體小鼠自交子代做了大量的胚胎期追蹤分析，發(fā)現(xiàn)EAcT純合體基因敲除小鼠在胚胎期65至75天死亡，胚胎發(fā)育停滯，原腸形成失敗。這揭示了PAcT在高等動(dòng)物早期胚胎發(fā)育過程中不可或缺的重要性。通過R1二PcR顯示，75天的PAcT純合體基因敲除胚胎中，口53的靶基因p21、Mdm2的mRNA水平顯著升高。因?yàn)镻ACT在體外實(shí)驗(yàn)中可以強(qiáng)烈的抑制p53的轉(zhuǎn)錄活性，所以我們推測(cè)PACT的缺