番茄耐冷性RAPD分子標(biāo)記的篩選及特異片段的克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該論文以番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)耐冷品系T9806和T9808、冷敏感品系T9801及已構(gòu)建好的耐冷性近等基因系T9801×T9806(BC7)、T9801×T9808(BC7)為材料,對其進(jìn)行鑒定,從近等基因系群體中選取高度耐冷個體及高度冷敏度個體各10株,分別建立耐冷基因池和冷敏感基因池,依據(jù)混合群體分組分析(BSA)和近等基因系(NILs)原理和方法,進(jìn)行RAPD實驗,從520個10堿基隨

2、機(jī)引物中篩選出了三個在兩池間及其建池單株中具有多態(tài)性的引物OPF-14、OPD-11、OPI-01.用T<,9806>、T<,9808>、T<,9801>及近等基因系群體單株DNA進(jìn)一步驗證,證明了這三個引物擴(kuò)增出的特異性片段OPF-14-800、OPD-11-1200、OPI-01-2000是三個與番茄耐冷基因連鎖的RAPD標(biāo)記.以MAPMAKER軟件計算出耐冷基因片段與OPF-14、OPD-11、OPI-01標(biāo)記間的遺傳距離分別為6

3、.1Cm,9.8cM12.3cM.選取其中遺傳距離最小的多態(tài)性片段OPF-14進(jìn)行克隆,用樹脂法從瓊脂糖凝膠中回收了OPF-14擴(kuò)增出的多態(tài)性片段,與載體pGEM<'R-F-Easy>連接,轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5-α.通過藍(lán)白斑篩選后,提取重組質(zhì)粒,經(jīng)PCR鑒定,回收的片段與RAPD擴(kuò)增所獲得的差異性片段大小一致,對克隆片段測序表明實際大小為792bp,并將此片段序列在網(wǎng)上進(jìn)行同源性比較,發(fā)現(xiàn)該片段與番茄抗pto(細(xì)菌角斑病)基因同源.該實

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