蘋果果皮紅色性狀RAPD分子標(biāo)記的篩選.pdf

1、本研究采用BSA(BulkedSegregantAnalysis)法結(jié)合RAPD(RandomlyAmplifiedPolymorphicDNA)分子標(biāo)記技術(shù)以蘋果三個雜交組合：舞姿×嘎拉、舞姿×短枝富士、舞姿×新紅星的F1雜交群體為試料，尋找蘋果果皮紅色性狀的分子標(biāo)記。研究結(jié)果如下：1.采用改良的CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)法，以蘋果休眠芽為試料提取蘋果基因組DNA。DNA質(zhì)量經(jīng)0.8％瓊脂糖凝膠電泳檢測。結(jié)果表明提取的DNA條帶

2、完整、質(zhì)量高、PCR擴(kuò)增條帶清晰、條帶數(shù)適中、且重復(fù)性好。2.根據(jù)分離群體分組分析法的原理，組成了兩個對比基因池，即紅色池和非紅色池。每個池包含來自舞姿×短枝富士雜交組合的10個F1個體，這10個個體除了在紅色或非紅色果皮色澤上具有差別之外，其它的性狀都是隨機(jī)的。篩選了355條10bp隨機(jī)引物，共擴(kuò)增出2783條清晰地DNA帶，平均每條引物擴(kuò)增7.8條DNA帶。其中有14個隨機(jī)引物沒有擴(kuò)增出產(chǎn)物，占總篩選引物的3.9％。分離群體分組分析

3、初步篩選出49個多態(tài)性引物，通過進(jìn)一步在群體上進(jìn)行驗(yàn)證，最終獲得4個多態(tài)性標(biāo)記，即S1289、S1235、S2107及S519，它們都能擴(kuò)增出與紅色性狀相關(guān)的標(biāo)記。S1235、S2107、S519均能在紅色池上和紅色個體上擴(kuò)增出一條多態(tài)性條帶，而S1289能在非紅色池和非紅色個體上擴(kuò)增出一條多態(tài)性條帶。估計(jì)S1289、S1235、S2107及S519擴(kuò)增出的多態(tài)性片段的大小分別為：1200bp、1000bp、1200bp及1000bp。

4、它們對F1群體色澤驗(yàn)證的符合率分別為：73.3％、71.7％、73.3％及71.7％。3.鑒于獲得的多態(tài)性標(biāo)記對果皮色澤判斷的符合率不高，存在較大誤差的現(xiàn)狀，我們提出了雙引物組合分析的方案。該方案只對雙標(biāo)記交換類型個體進(jìn)行淘汰，這樣使得獲得的標(biāo)記對色澤性狀預(yù)測的準(zhǔn)確率大幅度提高。群體上的分析表明，每個雙引物組合對色澤判斷的正確率均在90％以上。其中S1289-S2107標(biāo)記組合可使紅色性狀預(yù)測的準(zhǔn)確性達(dá)到98.3％，對色澤判斷的正確率從

5、單個引物的73.3％提高到98.3％。S2107-S519標(biāo)記組合可使紅色性狀預(yù)測的準(zhǔn)確行達(dá)到95％，對色澤判斷的正確率從單個引物的73.3％和71.7％提高到95％。4.另外，將獲得的4個多態(tài)性標(biāo)記在幾個栽培品種上進(jìn)行了擴(kuò)增，分析了它們在這些品種上的表現(xiàn)，大多數(shù)品種的表現(xiàn)與理論一致。5.據(jù)Cheng(1996)報道的一個與果實(shí)顏色相關(guān)的序列，合成了一對通用性引物。并在F1群體及幾個栽培品種上進(jìn)行了擴(kuò)增，結(jié)果表明該標(biāo)記F1群體色澤判斷的