利用ISSR和RAPD對白樺纖維長度性狀的標(biāo)記研究.pdf

1、本項(xiàng)研究通過測量和分析白樺天然種群中的583株個(gè)體的纖維長度，選擇其中100株個(gè)體，對這100株個(gè)體的基因組進(jìn)行ISSR和RAPD擴(kuò)增分析，通過分析擴(kuò)增條帶與對應(yīng)纖維長度的相關(guān)性，篩選出與白樺長纖維性狀顯著相關(guān)的SCAR標(biāo)記。主要結(jié)果如下： 1、通過對白樺天然種群中583株白樺個(gè)體纖維長度的測量和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明這583株白樺的纖維長度呈正態(tài)分布，符合數(shù)量基因控制性狀表型分布特點(diǎn)；為加大分析時(shí)不同個(gè)體間基因組擴(kuò)增差異，以纖維長

2、度均值加減1倍標(biāo)準(zhǔn)差為依據(jù)，選擇其中100株個(gè)體用于基因組差異分析研究。 2、在傳統(tǒng)CTAB法提取植物基因組DNA的基礎(chǔ)上，探索出一種更高效的DNA提取方法-多次STE-CTAB法。用此方法不僅能有效去除白樺等木本植物中的多糖、多酚和其它次生代謝物質(zhì)，而且得到的基因組DNA質(zhì)量完全滿足PCR及其分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)所要求的標(biāo)準(zhǔn)。 3、在系統(tǒng)分析了影響ISSR體系的各種因素基礎(chǔ)上，建立了白樺基因組ISSR反應(yīng)體系及程序：ISSR

3、-PCR，20μL體系：10×buffer2μL，Mg2+(25mmol/L)2μL，dNTPs(10mmol/L)0.4μL，引物(10mmol/L)0.8μL，TaqDNA聚合酶1U，模板DNA45ng2μL。反應(yīng)程序：94℃加熱5min，使模板DNA變性，然后進(jìn)入下列循環(huán)：94℃變性30s，51℃退火30s，72℃延伸30s，共計(jì)30個(gè)循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸7min； 4、通過對100株白樺個(gè)體基因組擴(kuò)增條帶與其對應(yīng)

4、的纖維長度的相關(guān)分析，得到了10條與白樺纖維長度密切相關(guān)的擴(kuò)增條帶(0.01≤P≤0.05)，其中6條ISSR片段和4條RAPD片段。回歸系數(shù)為正，說明此片段的出現(xiàn)會增加分析個(gè)體的纖維長度；反之，則會降低個(gè)體纖維長度。 5、將與白樺纖維長度密切相關(guān)的10條特異性片段中的7條(ISSRAW44123，ISSR-AW44116，ISSR-AW44117，ISSR-AW44133，ISSR-AW44137；RAPD-C27932，RA