RAPD、SRAP和ISSR標(biāo)記在香菇種質(zhì)資源的應(yīng)用及其SCAR標(biāo)記的建立.pdf

1、DNA分子標(biāo)記由于檢測(cè)手段簡(jiǎn)單、高效，滲透到許多領(lǐng)域，在遺傳育種研究、檢測(cè)和基因克隆、研究種間的遺傳多樣性和確定遺傳關(guān)系都有廣泛應(yīng)用。 在研究中，我們應(yīng)用RAPD、ISSR和SRAP標(biāo)記對(duì)40個(gè)香菇栽培種進(jìn)行種質(zhì)資源研究。在揭示香菇遺傳多態(tài)性方面，這些標(biāo)記已被證明是一種快速、可靠的檢測(cè)工具。和RAPD、SRAP和ISSR標(biāo)記比較，SCAR標(biāo)記更穩(wěn)定，重復(fù)性好。由RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化而來(lái)的SCAR標(biāo)記研究很多，但是由ISSR標(biāo)記轉(zhuǎn)化而

2、來(lái)的SCAR標(biāo)記研究很少，關(guān)于由SRAP標(biāo)記轉(zhuǎn)化SCAR標(biāo)記的研究還沒(méi)有見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)第一次研究了SRAP標(biāo)記轉(zhuǎn)化SCAR標(biāo)記。一些標(biāo)記被成功轉(zhuǎn)化成了SCAR標(biāo)記，這可以為我國(guó)實(shí)行香菇品種登記制度和知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)提供信息。 首先對(duì)香菇RAPD、SRAP和ISSR的反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，尤其是對(duì)反應(yīng)體系影響較大的因素如溫度、Taq酶用量、dNTP濃度、Mg2+濃度、引物濃度和模板濃度進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，建立了每個(gè)標(biāo)記的最佳反應(yīng)體系

3、。在RAPD、SRAP和ISSR標(biāo)記中，它們平均多態(tài)性比率分別為55.8％、51.2％、64.8％。通過(guò)對(duì)ISSR引物的篩選，我們發(fā)現(xiàn)香菇基因組中含有較多的三核苷酸重復(fù)序列。 采用這三個(gè)分子標(biāo)記分別對(duì)40個(gè)香菇栽培種進(jìn)行聚類(lèi)分析，建立聚類(lèi)圖。通過(guò)對(duì)它們間的穩(wěn)定性和重復(fù)性的比較，ISSR標(biāo)記的穩(wěn)定性和重復(fù)性最好，RAPD標(biāo)記最差。綜合這三個(gè)分子標(biāo)記的分析，我們更容易地區(qū)分40個(gè)多態(tài)性較低的香菇栽培種。其中，30(Cr66)與34(

4、L66)、22(申香4號(hào))與31(Cr33)、39(武香)與40(蘇香)判斷為同種異名。 從這些分子標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物的圖譜中，通過(guò)膠回收，我們選取了22個(gè)明亮、重復(fù)性好的條帶進(jìn)行T-載體克隆和測(cè)序。設(shè)計(jì)了22對(duì)引物，在SCAR引物驗(yàn)證中，有14對(duì)引物表現(xiàn)出和原標(biāo)記相似的多態(tài)性譜帶。這些轉(zhuǎn)化成功的14個(gè)SCAR引物中，從6個(gè)RAPD標(biāo)記中成功轉(zhuǎn)化了4個(gè)SCAR標(biāo)記，從11個(gè)SRAP標(biāo)記中成功轉(zhuǎn)化了8個(gè)SCAR標(biāo)記，從5個(gè)ISSR標(biāo)記中