木瓜屬種質(zhì)資源的SRAP分子標記與評價.pdf

1、木瓜屬(Chaenomeles)起源于我國，既是著名的觀賞花木又是傳統(tǒng)的中藥材，在園林綠化和中藥材、食品及化妝品生產(chǎn)中具有廣泛的應用。木瓜屬植物在我國約有三千多年的栽培歷史。由于本屬植物種間雜交容易，表型可塑性強，因此品種和類型十分豐富，這為園林應用提供了豐富的素材，但也造成了種質(zhì)資源鑒別和品種分類的困難。
　　 本文在廣泛收集全國木瓜屬種質(zhì)資源的基礎上，利用SRAP分子標記技術對98份木瓜屬種質(zhì)進行了研究，對供試材料進行聚類分

2、析，編制了木瓜屬的分子檢索表并進行了核心種質(zhì)的初步構建，為品種分類及鑒定、雜交育種的親本選擇和種質(zhì)資源保護等研究奠定了基礎。
　　 主要研究結(jié)果如下：
　　 1.運用二次正交旋轉(zhuǎn)組合設計得到木瓜屬SRAP-PCR反應的最優(yōu)體系，即Mg2+1.5mmol·L-1、dNTPs0.4mmol·L-、引物0.379μmol·L-1、TaqDNA聚合酶2U、模板DNA67.15ng，總體積為25μl。各因素對PCR反應的影響大小依

3、次為：TaqDNA聚合酶>Mg2+>dNTPs>模板DNA>引物。
　　 2.以SAS軟件為基礎，對PCR反應的5個因素進行了單因子效應分析和雙因子交互效應分析，初步闡明了各因素之間的相互作用關系并總結(jié)出一定的規(guī)律，為PCR反應的優(yōu)化提供借鑒。
　　 3.從157對SRAP引物中篩選出能穩(wěn)定擴增的引物32對，并利用其中較優(yōu)的17對引物對所有供試材料進行了擴增，共檢測到525個多態(tài)性位點，多態(tài)位點百分數(shù)為100％，平均每對

4、引物擴增出30.9個多態(tài)性位點；有效等位位點數(shù)(Ne)在1.0471～1.2274之間，平均值為1.1289；Nei's遺傳多樣性指數(shù)(H)在0.0428～0.1652之間，均值為0.1007；Shannon信息指數(shù)(Ⅰ)在0.0986～0.2863之間，均值為0.1911。
　　 4.98份供試材料之間的Nei遺傳相似系數(shù)范圍是0-0.6596，平均值為0.2192，表明各材料間親緣關系較遠。采用UPGMA聚類法可將98份材料

5、分為9類，其中種源為一級分類標準，雜交品種依據(jù)其雜交親本的來源首先聚類；花色、花型、瓣型及種源地作為二級分類標準互相影響小類群的劃分。對9個類的遺傳多樣性分析顯示，木瓜屬植物類間變異在總的遺傳變異中平均占23.2％，各類間的遺傳距離均不大且基因流動性較高(Nm=1.6580)，這也驗證了木瓜屬植物種間雜交容易、雜交品種較多的現(xiàn)狀。
　　 5.篩選出了6對核心引物用于構建木瓜屬指紋圖譜，其中引物ME3-EM3與另外5對引物中任意一

6、對兩兩組合均可以鑒別出所有品種。結(jié)合引物ME3-EM3和ME6-EM1擴增出的19條多態(tài)性條帶，借鑒常規(guī)植物檢索表編制方法，編制了98個品種的分子標記檢索表。
　　 6.以SRAP標記為基礎，構建木瓜屬種質(zhì)資源的核心種質(zhì)。按照10％～80％的整體取樣比例，依據(jù)分組法和不分組法分別取樣，對比兩方法的異同。另外，結(jié)合C語言編程，提出了適用于本屬植物核心種質(zhì)構建的方法：多態(tài)位點數(shù)最高法。與目前常用的核心種質(zhì)構建方法相比，該方法簡單高效