黃瓜雌性控制基因的SRAP和SCAR分子標(biāo)記.pdf

1、Y93“／508單位代碼—地量5西南大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜雌性控制基因的sRAP和SCAR分子標(biāo)記論文作者：畢喜紅指導(dǎo)教師：張興國(guó)(研究員)學(xué)科專(zhuān)業(yè)：蔬菜學(xué)研究方向：分子生物學(xué)與蔬菜遺傳育種提交論文日期：2006年5月25日論文答辯日期：2006年6月6日學(xué)位授予單位：西南大學(xué)中國(guó)重慶2006年06月西南大學(xué)碩士學(xué)位論文—■■●_曼置舅_岜童量_■—■—墨曼E蔓蔓曼II鼉■■|詈量■皇—曙皇曼■—■■■—罾基鼉置■皇■—■—■■■■■■—

2、■■—■■矗置—■皇一法(bulkedsegregantanlysis，簡(jiǎn)稱(chēng)BSA)在F2分離群體中挑選純雌株和純雄株，按濃度將14株純雌株等量混合，構(gòu)建雌性DNA池：將4株純雄株與3株強(qiáng)雄株等量混合構(gòu)建雄性DNA池。根據(jù)SRAP擴(kuò)增引物的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)和合成了62對(duì)SRAP擴(kuò)增引物，分別對(duì)黃瓜雌性基因組DNA池和雄性基因組DNA池進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)l％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增質(zhì)量，其擴(kuò)增結(jié)果是多條分散的帶i再經(jīng)過(guò)4％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的

3、分離，進(jìn)行凝膠固定、染色，顯色后，數(shù)碼照相記錄結(jié)果，觀察分析并獲得具有多態(tài)性好或能夠區(qū)分2個(gè)DNA樣品池差異的SRAP引物對(duì)。利用多態(tài)性好的SRAP引物對(duì)，對(duì)雌雄分離的F2群體進(jìn)行分析，尋找與全雌性具有相似分離規(guī)律的連鎖標(biāo)記。三、Sm謹(jǐn)標(biāo)記帶的DNA片段的回收、克隆和序列分析自聚丙烯酰胺凝膠電泳板上挖取與黃瓜全雌性狀相關(guān)的SRAP差異片段，加入TE后沸水浴中提取，經(jīng)PCR擴(kuò)增后采用TA克隆法克隆到pMDl8T載體上，轉(zhuǎn)化XLlblue大

4、腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，鑒定出陽(yáng)性克隆后委托上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序。將序列在NCBI基因庫(kù)中進(jìn)行同源性比對(duì)，鑒別所屬基因。四、SRAP標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記根據(jù)克隆的序列片段，設(shè)計(jì)和合成了用于SCAR標(biāo)記的PcR引物。用此引物對(duì)全雌和全雄DNA樣品池及其構(gòu)成個(gè)體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示有一條與黃瓜全雌性相關(guān)的帶。進(jìn)一步在雌雄分離的F2群體中進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示該特異條帶能在全雌單株中穩(wěn)定出現(xiàn)。因此，成功將SRAP標(biāo)記轉(zhuǎn)換成操作