黃瓜M基因分子標(biāo)記精細(xì)定位和圖位克隆初探.pdf

1、植物的性型是由多基因協(xié)作控制的，是長期進(jìn)化的結(jié)果。黃瓜的性型表達(dá)是一個(gè)復(fù)雜的過程。研究發(fā)現(xiàn)，黃瓜的性型表達(dá)主要由3對(duì)基因(M/m，F(xiàn)/f和A/a)控制，F(xiàn)/f基因控制植株的雌性化程度，M/m基因決定該植株所開的花是否單性花(M)或者兩性花(mm)；當(dāng)F基因是隱性純合時(shí)，性型表達(dá)受A基因影響，MMffA_基因型的表現(xiàn)型為雌雄異花同株，mmffA_基因型的表現(xiàn)型為雄全同株；M_ffaa與mmffaa基因型的表現(xiàn)型均為全雄株。本研究旨在尋找與

2、M基因連鎖的分子標(biāo)記，精細(xì)定位，進(jìn)而克隆M基因。 本文使用的黃瓜材料主要為S52和H34及其F<,1>代和F<,2>、BC<,1>群體。母本S52來源于國內(nèi)大別山農(nóng)家品種，是基因型為ffMMAA的雌雄異花同株自交系；父本H34是基因型為FFmmAA的兩性花自交系。F<,2>分離群體的167個(gè)單株中，有121株雌雄異花同株單株和46個(gè)兩性花單株，符合3：1分離比例，說明黃瓜單性花性型對(duì)兩性花性型為完全顯性，由一對(duì)核基因控制。

3、 本試驗(yàn)采用分離體分組混合分析法(BSA)來尋找與黃瓜M基因連鎖的分子標(biāo)記，選取群體中的雌雄異花單株和兩性花單株各10株，分別等量混合各株DNA，建成DNA單性花池和兩性花池。從736對(duì)隨機(jī)合成的SRAP引物組合中篩選出360對(duì)能在兩親本S52和H34間揭示出多態(tài)性的引物組合，多態(tài)性引物比例為48.9％。利用兩基因池(mm和M_)進(jìn)一步篩選，最后得到8對(duì)引物組合對(duì)池的擴(kuò)增產(chǎn)物有差異，分別為：ME8SA7，ME1EM23，ME1EM24

4、，ME1EM26，DC1EM9，ME67，ME42OD17，ME23SA4。用F<,2>分離群體的167個(gè)單株檢測后，分別用Mapmaker3.0軟件作圖分析，得出M基因兩側(cè)均有標(biāo)記，以上SRAP標(biāo)記與M基因的圖距分別為0，1.0，5.4，5.4，8.3，10.9，21.6和25.5cm。 將距M位點(diǎn)較近的分子標(biāo)記ME1EM24，ME1EM26，ME1EM23和ME8SA7的多態(tài)性條帶回收、測序，設(shè)計(jì)引物，轉(zhuǎn)化成SCAR標(biāo)記。這

5、些引物在兩親本及兩個(gè)池中均能揭示出多態(tài)性，并且得到預(yù)期大小的擴(kuò)增片段。進(jìn)一步用F<,2>群體的167個(gè)單株進(jìn)行分析，驗(yàn)證了其所擴(kuò)增位點(diǎn)的數(shù)據(jù)與原來的SRAP隨機(jī)標(biāo)記所擴(kuò)增的數(shù)據(jù)一致。由此證明這些SCAR標(biāo)記所擴(kuò)增的位點(diǎn)即為原來的SRAP標(biāo)記所擴(kuò)增的位點(diǎn)。對(duì)在F<,2>群體(167株)中未發(fā)現(xiàn)與M基因發(fā)生交換的標(biāo)記S ME8SA7在擴(kuò)大的900株(F<,2>群體670株，BC<,1>群體230株，親本同上)的分離群體中進(jìn)行檢測，依然未發(fā)現(xiàn)