仁用杏種質(zhì)資源親緣關(guān)系的SRAP分子標(biāo)記研究.pdf

1、仁用杏為我國(guó)北方特有經(jīng)濟(jì)作物,品種類型豐富,但其遺傳背景和親緣關(guān)系尚不清楚。本研究對(duì)我國(guó)主要栽培種植的仁用杏資源進(jìn)行了SRAP分析,從分子水平上明晰了遺傳背景、建立了親緣關(guān)系圖譜。
　　 基于對(duì)基因組DNA不同提取方法的比較,確定了適用于仁用杏基因組DNA提取的方法為改良CTAB法,效果較好。
　　 通過正交試驗(yàn),建立與優(yōu)化了仁用含SRAP-PCR標(biāo)記反應(yīng)體系:在反應(yīng)總體積20μL中,Mg2+2.5 mmol/L,Taq

2、 DNA聚合酶1.5 U,dNTPs0.2 mmol/L,引物0.9μmol/L,10×Buffer2μL,DNA模板50 ng。
　　 通過單因子實(shí)驗(yàn)確定了PCR程序?yàn)?94℃預(yù)變性5 min；94℃變性1 min,35℃復(fù)性1 min,72℃延伸1.5 min,5個(gè)循環(huán)；94℃變性1 min,52℃復(fù)性1 min,72℃延伸1.5 min,28個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min,4℃保存。
　　 利用4份DNA模板進(jìn)

3、行81對(duì)引物篩選試驗(yàn),選擇出了條帶清晰、穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的15對(duì)引物。采用篩選出的15對(duì)引物對(duì)供試的28份杏基因組DNA進(jìn)行SRAP分子標(biāo)記分析,對(duì)瓊脂糖凝膠圖譜中清晰、穩(wěn)定的條帶(200-2000 bp)進(jìn)行Gel-Pro軟件讀帶分析,15對(duì)引物共產(chǎn)生286條譜帶,每對(duì)引物組合可產(chǎn)生13-27條,平均每對(duì)引物產(chǎn)生19.1條,其中多態(tài)性條帶共252條,平均每對(duì)引物產(chǎn)生16.8條,多態(tài)性條帶占總帶數(shù)的88.11％。這些結(jié)果表明,優(yōu)化的S

4、RAP-PCR體系能較好地揭示出仁用杏種質(zhì)資源的遺傳多樣性,適用于其遺傳背景分析以親源關(guān)系研究。
　　 利用一對(duì)引物組合(Me4-Em4)的瓊脂糖凝膠電泳圖譜,編制了28份杏材料的指紋檢索表。
　　 15對(duì)引物的電泳結(jié)果數(shù)據(jù)導(dǎo)入POPGENE V1.32軟件,對(duì)仁用杏的遺傳多樣性進(jìn)行分析。仁用杏組的香農(nóng)指數(shù)為0.4112,普通杏組的香農(nóng)指數(shù)為0.2763；組內(nèi)遺傳變異度占總變異度的83.95％,組間遺傳變異度占16.05

5、％。結(jié)果表明,仁用杏的遺傳多樣性較高,遺傳變異主要存在于組內(nèi)。
　　 利用POPGENE V1.32軟件分析仁用杏、山杏和普通杏的親緣關(guān)系,結(jié)果表明,仁用杏與普通杏遺傳一致度為0.8374,與山杏遺傳一致度為0.8338,可見仁用杏與普通杏親緣關(guān)系近。
　　 對(duì)供試杏材料的SRAP指紋圖譜進(jìn)行UPGMA聚類分析,28份基因型相似系數(shù)為0.50-0.91,在相似系數(shù)為0.70時(shí),所有供試材料聚為4組,這與形態(tài)學(xué)分類結(jié)果基本