寒地蘋果種質(zhì)資源RAPD分子標記及其核心種質(zhì)初步構(gòu)建.pdf

1、寒地蘋果種質(zhì)資源是寒地果樹資源的寶貴財富，對其深入研究有利于今后更科學有效的保存與利用。本試驗主要以RAPD(隨機擴增多態(tài)性DNA)分子標記為主要研究方法，對寒地蘋果種質(zhì)資源遺傳多樣性進行研究，以期揭示不同資源間的親緣關(guān)系及其分類地位；尋找不同資源的特有RAPD標記，為今后的資源研究、品種鑒定、育種親本選擇及雜交后代性狀預測、早期選擇提供依據(jù)；并初步構(gòu)建寒地蘋果的核心種質(zhì)，以便資源的高效管理及遺傳多樣性的準確利用。主要研究內(nèi)容如下：

2、 1.改進了傳統(tǒng)的SDS基因組DNA提取方法，更適于提取富含蛋白質(zhì)、果膠類多糖及多酚類化合物等次生代謝產(chǎn)物的蘋果屬植物葉片基因組DNA。 2.優(yōu)化了RAPD反應(yīng)體系。所得最優(yōu)反應(yīng)體系為：反應(yīng)體積251μl，其中模板DNA 20 ng/μl，引物1.0μl濃度10pM，Tag DNA聚合酶1.0U，dNTP 0.2 mmol/L，PCR Buffer(含Mg<'2+>)2.5μl。擴增程序為：預變性94℃4min，變性94℃4

3、5s，退火溫度(37℃)45s，72℃延伸120s，共35個循環(huán)后，在72℃繼續(xù)延伸5min，然后在4℃保存。 3.利用RAPD技術(shù)對寒地蘋果266份種質(zhì)資源遺傳變異進行了研究，從200個10 bp隨機引物中篩選出25個多態(tài)性引物用于正式擴增，共擴增出245條DNA帶，其中多態(tài)性 DNA 帶229條，多態(tài)位點百分比達到93.47％。平均每個引物擴增的DNA帶的數(shù)目為9.8條。 4.有33份資源擴增出了1個以上的特有RAP

4、D標記，據(jù)此可以進行資源鑒定或以此為親本的雜交后代早期選擇。 5.利用DNA擴增結(jié)果構(gòu)建初級核心種質(zhì)180份，對其進行再聚類分析，得到如下結(jié)論： ①驗證了前人對山荊子系、海棠系和隴東海棠系親緣關(guān)系的經(jīng)典分類。但一些野生種的親緣關(guān)系與經(jīng)典分類學存在差別，有待進一步深入研究。 ②雜交后代的遺傳關(guān)系復雜，尚無分類歸屬，作者提出應(yīng)將這部分資源在分類地位上單獨列出一系——雜種群系的建議。 6.首次嘗試對寒地蘋果種質(zhì)