雞四種艾美耳球蟲免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫程序及其穩(wěn)定性試驗.pdf

1、雞球蟲病是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疾病之一，危害比較嚴(yán)重的主要有柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲4個種，臨床上往往為混合感染，因此研制抵抗這4種雞球蟲混合感染的多價疫苗顯得十分迫切，本實驗室已經(jīng)構(gòu)建了抵抗4種球蟲的混合多價DNA疫苗和多價多表位DNA疫苗，初步顯示了良好的免疫保護效果，為了比較球蟲DNA疫苗和弱毒苗及抗球蟲化學(xué)藥物的保護效果以及進一步提高多價DNA疫苗的免疫保護效果，本研究比較了DNA疫苗、

2、弱毒苗COCVAC和抗球蟲化學(xué)藥物地克珠利對單種球蟲感染和多種球蟲混合感染保護效果，對混合DNA疫苗的免疫程序和穩(wěn)定性進行了研究。
　　 本研究第一部分用本實驗室之前構(gòu)建的5種重組質(zhì)粒(pVAX1.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、 pVAX1.0-EM8-IL-2、 pVAX1.0-LDH-IL-2、 pVAX1.0-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2）、抗球蟲化學(xué)藥物地克珠利

3、和弱毒苗COCVAC進行單種球蟲感染和多種球蟲混合感染的保護性比較試驗。弱毒苗試驗組按照使用說明在6日齡通過飲水進行免疫;DNA疫苗試驗組在14日齡通過腿部肌肉注射分別接種相應(yīng)的質(zhì)粒，在21日齡加強免疫。在28日齡，除非免疫非攻蟲組外，其余分別經(jīng)口接種新鮮的E.tenella、E.necatrix、E.maxima、 E.acervulina和混合孢子化卵囊5×104個/羽、5×104個/羽、10×104個/羽、10×104個/羽、5×

4、104個/羽。在攻蟲的同時，地克珠利實驗組按使用說明在飲水中添加地克珠利(1mg/L，連續(xù)給藥3天)。7天后，剖殺所有試驗雞，對增重、每克腸道內(nèi)容物卵囊數(shù)、腸道病變計分和抗球蟲指數(shù)(ACI)等指標(biāo)進行統(tǒng)計，檢測其保護效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲以及混合攻蟲（含柔嫩、毒害、巨型和堆型4個蟲種），DNA疫苗的保護力均高于弱毒苗COCVAC和化學(xué)藥物地克珠利;對于堆型艾美耳球蟲，DNA疫苗的保護力高于弱毒

5、苗COCVAC，但略低于化學(xué)藥物地克珠利。
　　 本研究第二部分是將本實驗室構(gòu)建的免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2按1∶1∶1∶1混合后進行免疫程序篩選，在此基礎(chǔ)上再進行穩(wěn)定性實驗。主要包括以下幾個方面:
　　 1.四種雞艾美耳球蟲免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫劑量的篩選將免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1

6、.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2按1∶1∶1∶1混合后，分別以2μg、10μg、25μg、50μg、100μg、200μg免疫雛雞，各劑量組分別以柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲攻蟲。每個蟲種分別設(shè)立非免疫攻蟲對照組和非免疫非攻蟲對照組，共29組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柔嫩艾美耳球蟲組免疫保護效果最好的免疫劑量為10μg，ACI

7、為191.63。毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲免疫保護效果最好的免疫劑量均為25μg，ACI分別為177.31、168.84、165.49。
　　 2.雞四種艾美耳球蟲免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫途徑的篩選將混合DNA疫苗分別經(jīng)肌肉注射、靜脈注射、皮下注射、口服、滴鼻滴眼五個途徑免疫雛雞，各途徑分別以柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲攻蟲，每個蟲種設(shè)立非免疫攻蟲對照組和非免疫非攻蟲對照組

8、，共25組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各免疫攻蟲組中腿部肌肉注射組ACI均最高。其中柔嫩艾美耳球蟲攻蟲組ACI為162.89;毒害艾美耳球蟲攻蟲組ACI為179.54;巨型艾美耳球蟲攻蟲組ACI為174.94;堆型艾美耳球蟲攻蟲組ACI為167.10。腿部肌肉注射組免疫效果優(yōu)于其他免疫途經(jīng)組。
　　 3.雞四種艾美耳球蟲免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫首免日齡及免疫次數(shù)的篩選本試驗設(shè)計了一周齡首免不加強免疫組、一周齡首免二周齡加強免疫組、二周齡首免

9、不加強免疫組和二周齡首免三周齡加強免疫組四個實驗組，分別免疫混合DNA疫苗。各試驗組分別以柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲攻蟲，同時設(shè)立了非免疫攻蟲對照組和非免疫非攻蟲對照組，共21組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加強免疫組比非免疫組免疫保護效果好，除毒害艾美耳球蟲攻蟲組外，所有加強免疫組的ACI都大于160;二周齡首免組比一周齡首免組免疫保護效果好，二周齡首免三周齡加強免疫組效果最好。
　　 4.雞四種艾美耳球蟲免