雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)5種免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗免疫保護(hù)效果的比較.pdf

1、雞球蟲(chóng)病給養(yǎng)禽業(yè)所帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失極為嚴(yán)重。目前，應(yīng)用藥物防治遇到了球蟲(chóng)耐藥性和藥物殘留的問(wèn)題，大大限制了養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展，球蟲(chóng)防治需要尋求新的途徑。實(shí)踐證明，激發(fā)宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)來(lái)防治雞球蟲(chóng)病是更有效的途徑之一。作為第三代疫苗的DNA疫苗的一個(gè)顯著優(yōu)勢(shì)是刺激機(jī)體產(chǎn)生廣泛的細(xì)胞免疫反應(yīng)和持久的免疫記憶，尤其應(yīng)用特定的球蟲(chóng)保護(hù)性抗原聯(lián)合一些細(xì)胞因子，構(gòu)建調(diào)節(jié)型DNA疫苗，在球蟲(chóng)病防治中具有誘人的應(yīng)用前景。為此我們選擇球蟲(chóng)的抗原MZ5-7基因與雞細(xì)

2、胞因子IFN-γ、IL-18基因，通過(guò)DNA重組技術(shù)將球蟲(chóng)的抗原基因分別和雞細(xì)胞因子基因串聯(lián)為一體，插入到真核表達(dá)載體pcDNA4.0中，分別構(gòu)建了pcDNA4.0-MZ5-7-IFN-γ、pcDNA4.0-MZ5-7-IL-18兩種免疫調(diào)節(jié)型核酸疫苗，同時(shí)與pcDNA4.0-MZ5-7、pcDNA4.0-MZ5-7-IL-2、pcDNA4.0-MZ5-7-IL-17三種免疫調(diào)節(jié)型核酸疫苗進(jìn)行動(dòng)物免疫保護(hù)性試驗(yàn)比較這些DNA疫苗的免疫保

3、護(hù)效果。 利用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建好的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(E.tenella)MZ5-7原核表達(dá)載體pET28b-MZ5-7進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化后注射大鼠，制備大鼠E.tenella MZ5-7蛋白抗血清。將制備的MZ5-7蛋白血清用于MZ5-7基因疫苗在體內(nèi)蛋白表達(dá)的檢測(cè)。用特異性引物對(duì)MZ5-7基因疫苗在體內(nèi)表達(dá)進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。結(jié)果證明構(gòu)建的基因疫苗在體內(nèi)能很好地轉(zhuǎn)錄表達(dá)，說(shuō)明構(gòu)建的疫苗可用于動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)研究。

4、 動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn)分為非感染非免疫對(duì)照組，感染非免疫對(duì)照組，pcDNA4.0空質(zhì)粒組，pcDNA4.0-MZ5-7，pcDNA4.0-MZ-IL-18，paDNA4.0-MZ-IL-17，pcDNA4.0-MZ-IL-2，pcDNA4.0-MZ-IFN-γ組。每組30只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雞。制備好的基因疫苗經(jīng)肌肉于14日齡、21日齡兩次注射雛雞，28日齡經(jīng)口接種新鮮的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊。35日齡撲殺，分別作盲腸病變記分、克盲腸糞便卵囊數(shù)