雞四種艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫程序及其穩(wěn)定性試驗(yàn).pdf

1、雞球蟲(chóng)病是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疾病之一，危害比較嚴(yán)重的主要有柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)4個(gè)種，臨床上往往為混合感染，因此研制抵抗這4種雞球蟲(chóng)混合感染的多價(jià)疫苗顯得十分迫切，本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建了抵抗4種球蟲(chóng)的混合多價(jià)DNA疫苗和多價(jià)多表位DNA疫苗，初步顯示了良好的免疫保護(hù)效果，為了比較球蟲(chóng)DNA疫苗和弱毒苗及抗球蟲(chóng)化學(xué)藥物的保護(hù)效果以及進(jìn)一步提高多價(jià)DNA疫苗的免疫保護(hù)效果，本研究比較了DNA疫苗、

2、弱毒苗COCVAC和抗球蟲(chóng)化學(xué)藥物地克珠利對(duì)單種球蟲(chóng)感染和多種球蟲(chóng)混合感染保護(hù)效果，對(duì)混合DNA疫苗的免疫程序和穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。
　　 本研究第一部分用本實(shí)驗(yàn)室之前構(gòu)建的5種重組質(zhì)粒(pVAX1.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、 pVAX1.0-EM8-IL-2、 pVAX1.0-LDH-IL-2、 pVAX1.0-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2）、抗球蟲(chóng)化學(xué)藥物地克珠利

3、和弱毒苗COCVAC進(jìn)行單種球蟲(chóng)感染和多種球蟲(chóng)混合感染的保護(hù)性比較試驗(yàn)。弱毒苗試驗(yàn)組按照使用說(shuō)明在6日齡通過(guò)飲水進(jìn)行免疫;DNA疫苗試驗(yàn)組在14日齡通過(guò)腿部肌肉注射分別接種相應(yīng)的質(zhì)粒，在21日齡加強(qiáng)免疫。在28日齡，除非免疫非攻蟲(chóng)組外，其余分別經(jīng)口接種新鮮的E.tenella、E.necatrix、E.maxima、 E.acervulina和混合孢子化卵囊5×104個(gè)/羽、5×104個(gè)/羽、10×104個(gè)/羽、10×104個(gè)/羽、5×

4、104個(gè)/羽。在攻蟲(chóng)的同時(shí)，地克珠利實(shí)驗(yàn)組按使用說(shuō)明在飲水中添加地克珠利(1mg/L，連續(xù)給藥3天)。7天后，剖殺所有試驗(yàn)雞，對(duì)增重、每克腸道內(nèi)容物卵囊數(shù)、腸道病變計(jì)分和抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI)等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，檢測(cè)其保護(hù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)以及混合攻蟲(chóng)（含柔嫩、毒害、巨型和堆型4個(gè)蟲(chóng)種），DNA疫苗的保護(hù)力均高于弱毒苗COCVAC和化學(xué)藥物地克珠利;對(duì)于堆型艾美耳球蟲(chóng)，DNA疫苗的保護(hù)力高于弱毒

5、苗COCVAC，但略低于化學(xué)藥物地克珠利。
　　 本研究第二部分是將本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2按1∶1∶1∶1混合后進(jìn)行免疫程序篩選，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。主要包括以下幾個(gè)方面:
　　 1.四種雞艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫劑量的篩選將免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1

6、.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2按1∶1∶1∶1混合后，分別以2μg、10μg、25μg、50μg、100μg、200μg免疫雛雞，各劑量組分別以柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)。每個(gè)蟲(chóng)種分別設(shè)立非免疫攻蟲(chóng)對(duì)照組和非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組，共29組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柔嫩艾美耳球蟲(chóng)組免疫保護(hù)效果最好的免疫劑量為10μg，ACI

7、為191.63。毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)免疫保護(hù)效果最好的免疫劑量均為25μg，ACI分別為177.31、168.84、165.49。
　　 2.雞四種艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫途徑的篩選將混合DNA疫苗分別經(jīng)肌肉注射、靜脈注射、皮下注射、口服、滴鼻滴眼五個(gè)途徑免疫雛雞，各途徑分別以柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球、巨型艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)，每個(gè)蟲(chóng)種設(shè)立非免疫攻蟲(chóng)對(duì)照組和非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組

8、，共25組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各免疫攻蟲(chóng)組中腿部肌肉注射組ACI均最高。其中柔嫩艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)組ACI為162.89;毒害艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)組ACI為179.54;巨型艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)組ACI為174.94;堆型艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)組ACI為167.10。腿部肌肉注射組免疫效果優(yōu)于其他免疫途經(jīng)組。
　　 3.雞四種艾美耳球蟲(chóng)免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗混合免疫首免日齡及免疫次數(shù)的篩選本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了一周齡首免不加強(qiáng)免疫組、一周齡首免二周齡加強(qiáng)免疫組、二周齡首免

9、不加強(qiáng)免疫組和二周齡首免三周齡加強(qiáng)免疫組四個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別免疫混合DNA疫苗。各試驗(yàn)組分別以柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)，同時(shí)設(shè)立了非免疫攻蟲(chóng)對(duì)照組和非免疫非攻蟲(chóng)對(duì)照組，共21組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加強(qiáng)免疫組比非免疫組免疫保護(hù)效果好，除毒害艾美耳球蟲(chóng)攻蟲(chóng)組外，所有加強(qiáng)免疫組的ACI都大于160;二周齡首免組比一周齡首免組免疫保護(hù)效果好，二周齡首免三周齡加強(qiáng)免疫組效果最好。
　　 4.雞四種艾美耳球蟲(chóng)免