當(dāng)歸多糖對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力的影響.pdf

1、當(dāng)歸多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)對(duì)哺乳動(dòng)物具有免疫調(diào)節(jié)作用,但對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物是否具有免疫調(diào)節(jié)作用尚未見報(bào)道。本文首先從中草藥當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels中提純當(dāng)歸多糖,并對(duì)當(dāng)歸多糖亞組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。然后通過喂食、腹腔注射和體外試驗(yàn)研究當(dāng)歸多糖對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(EpinePhelus malabaricus)非特異性免疫力的影響,為當(dāng)歸多糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用提

2、供理論依據(jù)。
　　本論文主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論概況如下。用水煮醇沉法從中草藥當(dāng)歸中提取當(dāng)歸粗多糖,乙醇、丙酮脫色、Sevag法除蛋白質(zhì),透析、凍干得當(dāng)歸多糖P0。將當(dāng)歸多糖P0溶液用DE-52纖維素柱層析,依次用蒸餾水、0.1M NaCl、0.2MNaCl、0.4M NaCl洗脫得當(dāng)歸多糖P1、P2、P3和P4四種亞組分。采用高效液相色譜、紅外光譜和甲基化法研究當(dāng)歸多糖P1、P2、P3分子量和結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P1、P2、P3和

3、P4中蛋白質(zhì)分別為2.21％、1.38％、2.53％和2.34％,總糖分別為95.10％、94.73％、81.68％和79.51％,還原糖分別為5.75％、4.85％、4.86％和4.77％。當(dāng)歸多糖P1、P2、P3分子量分別為4.12x105Da,2.34～105Da和1.94～105 Da。當(dāng)歸多糖P1、P2、P3的單糖組成分別為Glc:Xyl:Gal=18:3:1,GlcA:Glc:Xyl:Gal:7:8:3:2和Glc:Xyl=

4、28:1。當(dāng)歸多糖P1、P2、P3的單糖殘基均為β構(gòu)型的吡喃環(huán)。當(dāng)歸多糖P1中Glcp為1→3,6、1→3和1→連接,Xylp和Galp為1→3連接;當(dāng)歸多糖P2中GlcAp為1→3連接,Glcp為1→3,6、1→3和1→連接,Xylp和Galp為1→3連接;當(dāng)歸多糖P3中Glcp為1→6、1→4、1→3,6、1→3和1→連接,Xylp為1→3連接。
　　為研究當(dāng)歸多糖對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力的影響,將當(dāng)歸多糖P0按0、

5、500、3000 mg/kg添加到飼料中,喂食點(diǎn)帶石斑魚4、8、12周后取樣。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P0能顯著提高點(diǎn)帶石斑魚血液白細(xì)胞吞噬能力,血清溶菌酶(LZM)活力,頭腎白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力、增殖活力和吞噬能力,降低Edwardsiella tarda攻毒后點(diǎn)帶石斑魚的累積死亡率。用3000 mg/kg的當(dāng)歸多糖PO連續(xù)喂食12周,點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力最高。
　　將當(dāng)歸多糖P0按0、500、3000 mg/kg添加到飼料

6、中,連續(xù)喂食101 d,研究當(dāng)歸多糖P0對(duì)點(diǎn)帶石斑魚生長(zhǎng)和非特異性免疫力的影響。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P0對(duì)點(diǎn)帶石斑魚攝食、生長(zhǎng)、體表黏液抗菌活力、血清一氧化氮(NO)、總蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白(A/G)值影響不顯著(p＞0.05);低劑量的當(dāng)歸多糖P0能顯著提高體表黏液LZM活力,而高劑量的當(dāng)歸多糖P0能顯著提高血液白細(xì)胞數(shù)、NBT陽性細(xì)胞數(shù),并能提高血液白細(xì)胞吞噬率和血清LZM活力;當(dāng)歸多糖P0能極顯著降低點(diǎn)帶石斑魚E. Tard

7、a攻毒后的累積死亡率,500、3000 mg/kg組的免疫保護(hù)率分別為45％、69％。
　　為研究當(dāng)歸多糖亞組分對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力的影響,將當(dāng)歸多糖P1、P2、P3按20 mg/kg體重的劑量腹腔點(diǎn)帶石斑魚,以當(dāng)歸多糖P0做對(duì)照,以無菌PBS做空白,在注射前和注射后第3、7、14、21、28 d取樣。結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)歸多糖P0及其亞組分能顯著提高點(diǎn)帶石斑魚體表黏液LZM活力、血液白細(xì)胞數(shù)和NBT陽性細(xì)胞數(shù)、血清LZM活力、NO

8、含量和A/G值。當(dāng)歸多糖P0能顯著提高點(diǎn)帶石斑魚體表黏液抗菌活力,而各多糖亞組分對(duì)黏液抗菌活力影響不顯著。當(dāng)歸多糖P0及其亞組分對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力具有時(shí)間一效應(yīng)關(guān)系:注射當(dāng)歸多糖免疫指標(biāo)升高,注射后28 d恢復(fù)到空白組水平。注射當(dāng)歸多糖P0及其亞組分均能降低E. Tarda攻毒后點(diǎn)帶石斑魚的死亡率,注射當(dāng)歸多糖P0組死亡率最低。單獨(dú)注射當(dāng)歸多糖各亞組分對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力的提高不及當(dāng)歸多糖P0。
　　為研究當(dāng)歸多糖亞

9、組分對(duì)頭腎白細(xì)胞免疫活性的影響,用不同濃度(0、1、10、100、1000μg/mL)的當(dāng)歸多糖亞組分P1、P2、P3體外孵育點(diǎn)帶石斑魚頭腎白細(xì)胞,以當(dāng)歸多耱P0做對(duì)照,測(cè)定當(dāng)歸多糖對(duì)白細(xì)胞增殖、呼吸爆發(fā)和吞噬能力的影響。結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖P0及其亞組分體外能提高點(diǎn)帶石斑魚頭腎白細(xì)胞增殖、吞噬和呼吸爆發(fā)活力。頭腎白細(xì)胞增殖和呼吸爆發(fā)活力隨當(dāng)歸多糖P0及其亞組分劑量的增加而增強(qiáng)。當(dāng)歸多糖P0(1000μg/mL)對(duì)增殖影響顯著。當(dāng)歸多糖P

10、2(1-1000μg/mL)對(duì)呼吸爆發(fā)活力影響顯著。頭腎白細(xì)胞吞噬能力隨當(dāng)歸多糖P0及其亞組分劑量的增加呈顯著的先升高后下降的趨勢(shì)。當(dāng)歸多糖P、P1為100μg/mL時(shí)吞噬能力最高,當(dāng)歸多糖P2和P3在10μg/mL時(shí)吞噬能力最高。
　　總之,當(dāng)歸多糖P0及其亞組分P1、P2、P3通過提高體液和細(xì)胞免疫的方式提高點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力。各亞組分單獨(dú)作用時(shí)對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力的提高不及當(dāng)歸多糖P0。當(dāng)歸多糖亞組分在結(jié)