點(diǎn)帶石斑魚(yú)的種質(zhì)研究.pdf

1、本研究采用同工酶電泳、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)與線粒體DNA-RFLP分析方法，首次研究了點(diǎn)帶石斑魚(yú)的部分種質(zhì)指標(biāo)及種質(zhì)資源狀況。 運(yùn)用聚丙烯酰胺垂直梯度凝膠電泳(PAGE)法對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)7種組織(眼睛、肌肉、心臟、肝臟、腎臟、尾鰭、脾臟)的4種同工酶(酯酶、超氧化物歧化酶、乳酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶)的研究結(jié)果表明：點(diǎn)帶石斑魚(yú)的4種同工酶(EST、SOD、LDH、MDH)都具有不同程度的組織特異性：EST由4個(gè)基

2、因位點(diǎn)編碼，具有多態(tài)現(xiàn)象：肌肉SOD與其它組織SOD的差異最明顯；眼睛LDH與其它組織LDH的差異最明顯；MDH具有線粒體型(m-MDH)和上清液型(sMDH)兩種類型。 在核基因水平，對(duì)海南點(diǎn)帶石斑魚(yú)養(yǎng)殖群體和野生群體的遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)分析，在養(yǎng)殖群體和野生群體各20尾中分別檢測(cè)到185和176條片段，其中多態(tài)性片段的比例分別為67.57％和75.00％，平均雜合度分別為0.4980和0.5311

3、，遺傳相似率分別為0.8165和0.7946，群體間遺傳距離為0.3296。Shannon遺傳多樣性指數(shù)表明，兩群體中的遺傳變異有59.05％來(lái)自群體間，而40.95％來(lái)自群體內(nèi)。野生群體的多態(tài)位點(diǎn)比例和雜合度明顯高于養(yǎng)殖群體。說(shuō)明點(diǎn)帶石斑魚(yú)野生種質(zhì)資源較好，應(yīng)加以合理保護(hù)。通過(guò)與幾種海水魚(yú)類的比較得知，海南點(diǎn)帶石斑魚(yú)遺傳多樣性豐富，種質(zhì)狀況良好。 在線粒體DNA水平，采用差速離心等方法，從養(yǎng)殖和野生群體點(diǎn)帶石斑魚(yú)肝組織中提取線

4、粒體DNA，并用20種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行單酶酶切分析。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后計(jì)算出各酶切片段的大小，測(cè)得點(diǎn)帶石斑魚(yú)mtDNA的分子大小為16.11 kb。用引物(正向引物5’CGA ACG TTG ATA TGA AAA ACC ATC GTT G 3’，反向引物5’AAA CTG CAG CCC CTCAGA ATG ATA TTT GTC CTC A 3’)對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)養(yǎng)殖群體和野生群體線粒體細(xì)胞色素b(Cyt b)基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然

5、后用利用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性DNA(RFLP)技術(shù)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析，在養(yǎng)殖群體和野生群體各20尾中未檢測(cè)到群體多態(tài)性。 綜合上述結(jié)果，得出結(jié)論：點(diǎn)帶石斑魚(yú)四種同工酶都具有不同程度的組織特異性(EST、SOD、LDH、MDH)；海南點(diǎn)帶石斑魚(yú)遺傳多樣性較豐富，無(wú)論野生群體還是養(yǎng)殖群體的種質(zhì)資源狀況良好，養(yǎng)殖群體遺傳多樣性低于野生群體，這可能與養(yǎng)殖親本數(shù)量少、近親機(jī)會(huì)增加造成部分基因丟失有關(guān)；點(diǎn)帶石斑魚(yú)mtDNA的分子大小為16.