斜帶石斑魚IL-8及其受體基因的克隆、表達(dá).pdf

1、在實(shí)驗(yàn)室已建的斜帶石斑魚頭腎SMART cDNA文庫(kù)的基礎(chǔ)上,對(duì)IL-8及IL-8R1基因進(jìn)行了克隆及序列分析。結(jié)果表明,斜帶石斑魚IL-8基因cDNA全長(zhǎng)1143bp,其中5’非編碼區(qū)(5’-UTR)345bp,3’非編碼區(qū)(3’-UTR)507bp,開放閱讀框(ORF)291bp,編碼96個(gè)氨基酸殘基,包括23個(gè)氨基酸殘基的信號(hào)肽和73個(gè)氨基酸殘基的成熟肽；氨基酸同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),斜帶石斑魚IL-8與黑鯛I(yíng)L-8的同源性最高,為95％,

2、其次為花鱸和舌齒鱸,同源性分別為93％和91％,與紅鰭東方鲀、褐牙鲆、錦鯉、虹鱒IL-8的同源性分別為為86％、77％、69％、59％,而與軟骨魚綱的皺唇鯊IL-8的同源性只有53％。斜帶石斑魚IL-8R1基因cDNA全長(zhǎng)1505bp,其中5’非編碼區(qū)(5’-UTR)37bp,3’非編碼區(qū)(3’-UTR)394bp,開放閱讀框(ORF)1074bp,編碼357個(gè)氨基酸殘基,包括62個(gè)氨基酸殘基的信號(hào)肽和295個(gè)氨基酸殘基的成熟肽；氨基酸

3、同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),斜帶石斑魚IL-8R1和鱖魚CXCR1的同源性最高,為82％,其次為紅鰭東方鲀和褐牙鲆,其同源性分別為70％和68％,虹鱒和錦鯉IL-8R1與斜帶石斑魚IL-8R1的同源性分別為65％和55％。另外,設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物對(duì)IL-8R2片段進(jìn)行擴(kuò)增,克隆得到中間片段531bp,編碼177個(gè)氨基酸。氨基酸同源比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn),斜帶石斑魚IL-8R2與紅鰭東方鲀IL-8R2的同源性最高,為81％,其次為虹鱒IL-8R,同源性為54％。

4、>　　 以PET21a為載體,構(gòu)建了IL-8和IL-8R1的原核表達(dá)質(zhì)粒,并成功在大腸桿菌中表達(dá)了含6個(gè)組氨酸標(biāo)記的斜帶石斑魚IL-8和IL-8R1重組蛋白,TricineSDS-PAGE表明斜帶石斑魚IL-8的重組蛋白分子量為9.1kDa。SDS-PAGE表明斜帶石斑魚IL-8R1的重組蛋白分子量為34.34kDa。
　　 利用Real-time PCR對(duì)溶藻弧菌感染和苯酚、CdCl2、CuSO4處理后的斜帶石斑魚IL-8及