斜帶石斑魚尾加壓素Ⅱ及其受體基因的克隆、表達(dá)及其攝食調(diào)控分子機(jī)理的初步研究.pdf

1、尾加壓素Ⅱ(Urotensin Ⅱ，UⅡ)最初從魚類尾部神經(jīng)分泌系統(tǒng)(Caudal Nuerosecretory System,CNSS)中分離得到，并被認(rèn)為具有促平滑肌收縮和調(diào)節(jié)滲透壓的作用。隨著上世紀(jì)末UⅡ及其受體UT在哺乳類中的發(fā)現(xiàn)，UⅡ/UT在一些常見疾病中的作用引起了人們廣泛的關(guān)注，然而對其在魚類中的作用仍知之甚少。 本研究利用RT—PCR和RACE技術(shù)，從斜帶石斑魚中克隆并鑒定了UⅡ及其受體UT全長cDNA序列。其中

2、UⅡcDNA全長966bp，5’非編碼區(qū)長57bp，開放讀碼框(open reading frame，ORF)387bp，3’非編碼區(qū)長519bp。由cDNA全長推導(dǎo)出的UⅡ前體由129個(gè)氨基酸序列組成，其中包含21個(gè)氨基酸的信號(hào)肽，96個(gè)氨基酸的前肽及12個(gè)氨基酸的成熟肽。成熟肽中包含保守的六肽環(huán)序列—Cys—Phe—Trp—Lys—Tyr—Cys—。UTcDNA全長1461bp，其中包括84bp的5’端非編碼區(qū)，1071bp的ORF

3、，309bp的3’非編碼區(qū)。1071bp的ORF共編碼357個(gè)氨基酸，含7個(gè)跨膜區(qū)，屬于七次跨膜的G蛋白受體家族。同源性分析發(fā)現(xiàn)斜帶石斑魚UⅡ與歐洲川鰈(Platichthys flesus)的同源性很高，達(dá)到87％，與哺乳類的同源性則較低，僅為26％，而UT與斑馬魚同源性最高，達(dá)到88％，而與川鰈只有52％。 采用Real—timePCR對UⅡ及UT在斜帶石斑魚不同組織及胚胎發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量進(jìn)行了研究。UⅡ及UT在所有被檢測的

4、13個(gè)組織中均有表達(dá)，兩者在CNSS和性腺都有很高的表達(dá)量，且在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，下丘腦中的表達(dá)量均高于其他腦部各區(qū)，另外，中樞組織的表達(dá)量明顯高于外周組織。本研究首次在魚類不同胚胎發(fā)育時(shí)期檢測了UⅡ/UT的表達(dá)量，除了UⅡ在多細(xì)胞期和囊胚期沒有表達(dá)外，UⅡ/UT在檢測的其它時(shí)期中均有表達(dá)，且在心臟彤成期，兩者的表達(dá)量顯著地高于其它時(shí)期。 本文通過腹腔注射UⅡ?qū)嶒?yàn)初步探討了UⅡ/UT系統(tǒng)在斜帶石斑魚攝食調(diào)控中的分子機(jī)理。研究發(fā)現(xiàn)注